【摘 要】
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本研究旨在建立绵羊无浆体的实时荧光定量PCR检测方法.利用实验室保存的12株绵羊无浆体的gltA基因进行克隆测序.然后根据获得的绵羊无浆体和GenBank上其他相近病原体的gltA基
【机 构】
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家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃兰州730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究旨在建立绵羊无浆体的实时荧光定量PCR检测方法.利用实验室保存的12株绵羊无浆体的gltA基因进行克隆测序.然后根据获得的绵羊无浆体和GenBank上其他相近病原体的gltA基因序列设计出针对绵羊无浆体的实时荧光定量引物和探针,建立了一种检测绵羊无浆体的实时荧光定量PCR方法.该方法特异性强,与相近病原如边缘无浆体、牛无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、支原体、衣原体、螺旋体、巴贝斯虫(新疆分离株)和吕氏泰勒虫无交叉反应.检测灵敏度约10拷贝/μL.该方法具有较好的稳定性,组内试验和组间试验Ct值变异系数分别在在0.26％-0.97％和0.42％-1.5％.对野外采集的254份山羊血液样品分别使用该方法和普通PCR方法进行检测,阳性率分别为25.6％和9.06％,结果表明实时荧光定量PCR方法具有更高的敏感性.建立的绵羊无浆体实时荧光定量PCR方法可以有效检测绵羊无浆体感染.
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