肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞CD2AP和ZO-1表达的影响

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目的:观察肾康丸对受损足细胞中CD2AP和ZO-1mRNA及蛋白表达的影响,探讨其在足细胞中的生理功能,为今后用药治疗方面提供分子学基础。方法:SD大鼠适应性喂养1周后随机分成肾康丸组、美卡素组及正常血清组。给药组灌服相应药物混悬液,正常血清组灌服等容积生理盐水。每日1次,连续7日,期间所有大鼠正常饮食。末次灌药2h后取血。培养足细胞,2W后将足细胞按一定密度接种在培养板上,分为5组。Ⅰ组:正常糖组(正常糖10mmol/L);Ⅱ组:高糖组(高糖30mmol/L);Ⅲ组:正常血清组(高糖组+正常大鼠血清);Ⅳ组:肾康丸组(高糖组+肾康丸含药血清);Ⅴ组:美卡素组(高糖组+美卡素含药血清);另设空白对照组。用RT-PCR法检测足细胞CD2AP和ZO-1mRNA的表达,以GAPDH为内参,以CD2AP和ZO-1与GAPDHmRNA的比值为相对表达量。提取足细胞总蛋白,用蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。进行蛋白电泳及底物增强化学发光显影。最后用SPSS17.0统计软件进行统计分析。结果:高糖组及正常血清组足细胞CD2AP和ZO-1mRNA的相对表达量较正常糖组显著下降(P<0.01),肾康丸组两者mRNA表达相对于高糖组及正常血清组均有显著上调(P<0.05),且均与正常糖组间相比无统计学差异(P>0.05)。以β-actin为参照物,高糖组和正常血清组中CD2AP和ZO-1蛋白表达均明显低于正常糖组,而肾康丸组稍略低于正常糖组,与高糖和正常血清组差异显著。结论:肾康丸能上调受损足细胞CD2AP和ZO-1 mRNA的表达,提高受损足细胞CD2AP和ZO-1蛋白的表达,维持足细胞的基本结构及形态,减少蛋白尿。
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