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建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定应用痰热清注射液后生物基质中多个组分方法。采用Phenomenex C18(50×2.1 mm,3μm)分析柱,甲醇、乙腈和0.006%冰乙酸(氨水调pH 4.2)作为流动相,梯度洗脱。人血浆样品经SPE纯化、大鼠血浆及其组织经甲醇直接沉淀后进样、MRM模式双内标法定量,绿原酸、汉黄芩素、黄芩苷、野黄芩苷、代谢物M1和内标厚朴酚、原儿茶醛的检测离子对分别为353.2/191.0,283.2/267.7,445.2/269.0,459.2/283.1,609.0/431.0,265.2/247.0和136.8/107.8。在各成分在标准曲线范围内线性关系良好(r<0.99),方法回收率、批内及批间RSD符合生物样品测定要求。