论文部分内容阅读
研究背景:经典免疫学理论认为免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)只能由B细胞产生,本课题组经过多年的研究已经证实非B细胞也可以产生Ig,特别是在肿瘤细胞中高水平表达。非B细胞来源的Ig与经典Ig的可变区呈现高度多样性相比,其可变区的多样性是有限的,特别是相同谱系非B细胞中,其Ig可变区V-D-J(重链)或V-J(轻链)的重排模式是高度保守的,提示其功能可能也相对保守。前期工作发现,不同上皮来源的肿瘤细胞可以表达带有一致重排模式(包括突变模式)的Igκ型轻链——Vκ4-1/Jκ3型轻链(Vκ4-1/Jκ3 lightchain, Vκ4-1/Jκ3-LC)。经序列比对发现,此Vκ4-1/Jκ3-LC与轻链沉积病和系统性淀粉样变中致病的Vκ4-1型轻链具有高度同源性。利用针对Vκ4-1/Jκ3-LC的特异性单抗,发现其也会以游离、疏水形式存在,带有N-糖基化修饰,易形成二聚体和多聚体。Vκ4-1/Jκ3-LC广泛存在于多谱系来源的非B细胞中,并且高表达于肿瘤细胞中,在细胞内呈现丝网状结构,并与中间丝成分角蛋白相互作用,促进肿瘤细胞的周期演进和转移,提示Vκ4-1/Jκ3-LC可能是迄今未发现的一种细胞骨架相关蛋白。研究目的 :明确Vκ4-1/Jκ3-LC与三种经典细胞骨架(微丝、微管、中间丝)的关系,及其对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响,探究其相互作用蛋白和发挥功能的分子机制。方法 :通过共定位分析及相互作用相关实验,明确Vκ4-1/Jκ3-LC与三种经典细胞骨架蛋白的关系,找到相互作用蛋白。通过敲减或过表达Vκ4-1/Jκ3-LC,明确其对细胞功能的影响。结果 :Vκ4-1/Jκ3-LC的丝状结构不依赖三种经典细胞骨架,其与中间丝(不与微丝和微管)存在共定位,与多种中间丝交联。敲减Vκ4-1/Jκ3-LC使中间丝和微丝组装障碍,细胞伪足形成减少、运动、侵袭及肿瘤细胞转移能力下降。机制研究发现,Vκ4-1/Jκ3-LC与一个近年来备受关注的可促进微丝与中间丝组装的蛋白-plectin相互作用,并促进plectin的稳定性,这可能是其影响微丝和中间丝组装的关键。结论 :Vκ4-1/Jκ3-LC是一种潜在的细胞骨架相关蛋白,与肿瘤细胞的运动能力密切相关。