【摘 要】
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目的 探讨PKCβ/p66Shc氧化应激通路介导高氧诱导A549细胞凋亡的作用.方法 在体外培养人A549肺泡上皮细胞系,随机分为对照组(仍置于含5％CO2培养箱中)、高氧组(通入3L/min
【机 构】
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泸州医学院附属医院新生儿科,四川泸州646000
【出 处】
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2013国际新生儿重症监护学高峰论坛
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目的 探讨PKCβ/p66Shc氧化应激通路介导高氧诱导A549细胞凋亡的作用.方法 在体外培养人A549肺泡上皮细胞系,随机分为对照组(仍置于含5％CO2培养箱中)、高氧组(通入3L/min的900ml/L O2和50/L CO2高纯混合气,10分钟后密闭培养.)、LY333531组(用终浓度为10μmol/L的等量PKCβ特异性抑制剂LY333531培养液预处理24h后,再用高氧诱导A549细胞,10分钟后密闭培养).倒置相差显微镜观察12、24、48h后细胞形态变化,流式细胞仪检测24小时后细胞凋亡率,细胞免疫化学检测24小时后细胞中PKCβ/Pinl/p66Shc/p66Shc-Ser36蛋白的表达变化. 结果 (1)倒置显微镜下：与对照组相比,高氧组细胞形态变圆,间隙加大,活细胞数量明显降低,悬浮细胞明显增多.LY333531组活细胞数量较高氧组增多,悬浮细胞数减少,但是未达到对照组的水平.(2)与对照组相比,24小时后高氧组凋亡率明显增加(P＜0.01)与高氧组相比,LY3333531组凋亡率明显降低,差异有显著性(P＜0.01).(3)与对照组相比,高氧组24小时后A549细胞内PKCβ/Pinl/p66Shc/p66Shc-Ser36蛋白表达均明显增加,差异有显著性(P＜0.05).与高氧组相比,LY3333531组Pinl/p66Shc/p66Shc-Ser36的表达明显降低,差异有显著性(P＜0.05).结论 高氧能诱导肺泡上皮细胞内PKCβ表达增多,进而p66Shc表达增多,发生磷酸化,然后转位于线粒体,导致凋亡的发生.LY333531能抑制PKCβ蛋白的表达,进而减少Pinl、p66Shc、p66Shc-Ser36蛋白表达,从而减少A549细胞凋亡来明显减轻高氧诱导的人肺泡上皮细胞的损伤.
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