【摘 要】
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克隆了湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系9704A及其保持系9704B的顺乌头酸酶基因(ACO),并进行了时空表达分析,以探讨其表达与雄性不育的关系。在辣椒盛花期取造胞细胞增殖期、花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期、成熟花粉粒期的花蕾提取RNA,用High Fidelity PrimeScript(@)RT-PCR Kit(TaKaRa)进行逆转录反应。根据GenBank上已报道的茄科植
【机 构】
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云南农业大学园林园艺学院,昆明650224 昆明理工大学现代工程学院,昆明,650500
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克隆了湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系9704A及其保持系9704B的顺乌头酸酶基因(ACO),并进行了时空表达分析,以探讨其表达与雄性不育的关系。在辣椒盛花期取造胞细胞增殖期、花粉母细胞减数分裂期、小孢子单核靠边期、成熟花粉粒期的花蕾提取RNA,用High Fidelity PrimeScript(@)RT-PCR Kit(TaKaRa)进行逆转录反应。根据GenBank上已报道的茄科植物的顺乌头酸酶(ACO)基因序列,设计特异引物ACO-F1：5-ATGTATA GTAATACAGCTCGCAAGT-3；ACO-R1：5-GTGGTCGAAAGATCAGTTAA-3；根据获得的序列,设计实时荧光定量PCR引物ACO-F2：5-TGGTAGCCGTCGTGGTAATG-3；ACO-R2：5-GAGGGAA TGTGGACAGTCTTTG-3。内参为β-ACTIN基因(DQ252512),引物为β-A CTIN-5-TGCAGGAATCC ACGAGACTAC-3,β-ACTIN-5-TACCACCACTGAGCACAATGTT-3。用High Fidelity PrimeScript(@)RT-PCR Kit(TaKaRa)进行基因的表达分析,具体步骤参照使用说明书。
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