产碱杆菌DN25氰降解酶法机理研究

来源 :第六届全国化学工程与生物化工年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mayf014
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本文利用实验室分离保藏的一株具有高效降氰活性的产碱杆菌Alcaligenes sp.DN25,通过分析分别以氰化钾、甲酰胺为底物的降解产物和文献报道[1]的F-、Pb2+、Hg2+、N3-对其降氰活力的影响来确定其降解途径,并根据目的酶的催化机理对产酶条件进行了优化.结果表明,氰的降解途径可推断为氰水解酶、氰水合酶和酰胺水解酶共同作用的水解途径,而其中氰水解酶的活性起主要作用,并且终产物为甲酸和氨,甲酰胺为中间产物;0.2 mM的F-、Pb2+、Hg2+对降氰酶有一定的抑制作用,0.2 mM Fe3+对氰降解酶活性有一定的促进作用,尤其10 mM N3-对氰降解酶的促进作用最强,符合文献报道[1]的其他降氰菌株的特性,再次确定了产碱杆菌DN25的代谢机理;在培养基中分别添加四种含硫物质,发现DL-半胱氨酸对菌体产酶有明显促进作用,DL-甲硫氨酸可同时提高菌株的产酶水平和细胞生长量,从而使得培养物比活分别达到1.26 U/mL和2.10U/mL.在1L三角瓶中进行扩大培养优化,得到最佳培养条件:装液量100 mL,pH 9.0,接种量8%,在基本培养基中添加0.8%的DL-甲硫氨酸.菌株的生长曲线和产酶曲线趋势基本一致,培养40 h后进入稳定期,培养物比活力平均值为2.18 U/mL,是优化前的3.46倍.研究结果为将来利用酶制剂进行降解和酶纯化分离工作奠定了基础.
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