背景:赭曲霉毒素是由真菌如曲霉菌和青霉菌分泌的有毒代谢物,是400多种具有不同化学结构和毒性作用的真菌毒素的主要组成部分。赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）具有肾毒性,免疫毒性和致畸作用,并被国际癌症研究机构（IARC）归类为致癌物质。目的:在制备OTA特异性单克隆抗体的的基础上,研制出OTA直接竞争酶联免疫（cd-ELISA）检测试剂盒,为谷物中OTA免疫快速筛选方法的建立奠定基础。方法及结果:采用活化酯法将OTA分别与大分子载体即蛋白牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）连接。紫外扫描和SDS-PAGE鉴定表明OTA与BSA、OTA与OVA偶连成功。用OTA-BSA免疫6-8周龄Balb/c,测定小鼠血清中抗体效价及敏感性。小鼠体内抗体效价最高可达1:5.12×104。选择免疫效果较好的小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合。经三次亚克隆筛选得到2株可稳定分泌抗OTA的单克隆细胞株,分别命名为1B1和2G2。体内诱生腹水法制备单抗腹水,辛酸-硫酸铵法对其进行纯化。通过ELISA方法鉴定两株单抗的效价均达到10⁷。其中2G2的IC₅₀值为4.88ng/ml,亲和力常数为2.11×10¹¹L/mol。采用简易过碘酸钠法将2G2制备成酶标抗体。该试剂盒的IC₅₀为2.046ng/mL,与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为3.32%和0.27%。板内与板间的平均变异系数分别为2.47%和2.89%。玉米和小麦的检测限分别为0.152ng/mL和0.215ng/mL,平均添加回收率在82.5%-108%。