系统应用牙龈间充质干细胞促进骨质疏松大鼠种植体骨结合的研究

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目的:口腔种植已经成为修复牙列缺失和牙列缺损的常规治疗方法。骨质疏松由于骨代谢的异常成为了种植的相对禁忌症。本实验旨在探究系统应用牙龈间充质干细胞对骨质疏松大鼠种植体骨结合的影响。方法:GFP+C57/BL转基因小鼠牙龈间充质干细胞(GMSCs),流式检测细胞表面标记物,并行分化诱导。将72只3月龄wistar大鼠随机分为3组:A组(正常+PBS)、B组(去势+PBS)、C组(去势+GMSCs)。B、C组:摘除双侧卵巢,建立骨质疏松模型;A组:摘除双侧卵巢周围脂肪组织。术后3个月每组处死3只大鼠,通过测定ALP及组织HE染色鉴定模型是否成功建立。模型成功建立后,各组大鼠均于双侧股骨远心端植入种植体,术前30分钟分别尾静脉注射GMSCs悬浮液或PBS,术后1周、4周、8周处死各组大鼠,行RT-PCR检测种植体周围骨组织成骨相关基因及炎症因子的表达,同时标本固定包埋后硬组织切片,行骨组织形态学分析和计量学研究。4周标本固定、脱钙、包埋后通过免疫组化及DAPI染色检测GFP+GMSCs归巢。结果:1、C57/BL小鼠GMSCs为典型成纤维细胞形态,GFP表达阳性且稳定。流式细胞术证明其干细胞特性。诱导培养具有成骨及上皮化的能力。2、去势组大鼠ALP活性明显高于正常组,差异具有统计学意义。HE染色表明:去势组相对于正常组大鼠股骨骨小梁数目减少,部分骨小梁变细断裂,不连续,骨髓腔变大。3、RT-PCR检测结果:术后1周,A组、C组BSP表达高于B组,差异有统计学意义;A组、C组OPN较B组高表达,A、B两组间有统计学意义,B、C两组间无统计学意义;B组IL-1表达显著高于A组、C组,差异具有统计学意义。术后4周,A组、C组BSP、OPN与B组比较高表达,A组、C组IL-1表达下调,差异具有统计学意义。术后8周,A组、C组BSP表达上调,与B组差异无统计学意义,A组、C组OPN较B组高表达,IL-1较B组低表达,具有统计学意义。4、1周、4周、8周硬组织切片结果显示A组、C组种植体骨结合率高于B组,1周时B组和C组差异无统计学意义,其余均有统计学意义。5、4周组织种植体周围组织可见GFP+细胞归巢。结论:1、酶解法分离培养GFP+牙龈间充质干细胞操作简便,GFP表达稳定。牙龈间充质干细胞有成骨向分化及成上皮样细胞分化的潜能。2、骨质疏松症对种植体骨结合产生影响。系统应用GMSCs,可在种植体周围新生组织中检测到GFP+GMSCs的归巢,改变种植体周围骨组织中炎症因子及成骨相关因子的表达情况,并部分分化为成骨细胞参与新生骨的形成,促进种植体的骨结合。
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