【摘 要】
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目的：DNA甲基化作为经典表观遗传调控方式,参与了基因转录调控和致癌作用等过程.镉(Cd)及其化合物(Cd2+)是常见的环境污染物,可诱导遗传毒性损伤(如DNA链断裂)；有研究发现长期Cd暴露可介导多种基因(如RASSF1A、p16等)启动子区高甲基化状态,从而抑制基因的转录.为探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)功能活性调控在镉毒性中的作用机制,本研究拟分析镉处理细胞中PP2A-Aα基因(PPP2R1
【机 构】
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厦门大学公共卫生学院 福建厦门,361102 中山大学公共卫生学院
【出 处】
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中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会学术会议暨环境内分泌干扰物的毒理学研究新技术新方法研讨会
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目的：DNA甲基化作为经典表观遗传调控方式,参与了基因转录调控和致癌作用等过程.镉(Cd)及其化合物(Cd2+)是常见的环境污染物,可诱导遗传毒性损伤(如DNA链断裂)；有研究发现长期Cd暴露可介导多种基因(如RASSF1A、p16等)启动子区高甲基化状态,从而抑制基因的转录.为探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)功能活性调控在镉毒性中的作用机制,本研究拟分析镉处理细胞中PP2A-Aα基因(PPP2R1A)启动子区甲基化状态及其转录水平的改变.方法：采用永生化人正常肝L02细胞及肝细胞癌HepG2细胞为研究对象,给予不同浓度(20、40、601μM)的CdC12处理24h,以不同剂量(2.5、5.0、10μM)甲基转移酶抑制剂5-Aza处理细胞48h作为阳性对照,并给予5-Aza预处理48h后给予CdCl2处理24h进行验证；qRT-PCR检测各处理组细胞中PPP2R1AmRNA水平.40μM CdC12处理两种不同细胞24h后,提取各处理组细胞基因组DNA,重亚硫酸盐修饰法(BSP)处理,分别采用非甲基化和甲基化引物PCR获得PPP2R1A近端启动子区(-448～+237nt)目的片段,采用TA克隆测序验证和分析各CpG二核苷酸位点甲基化比例.结果：与阴性对照组比较,各剂量CdCl2处理组L02细胞中PPP2R1AmRNA降低倍数分别为0.95、0.82、0.77,在HepG2细胞中降低倍数分别为0.95、0.93和0.87,两细胞改变趋势相同、且均具有明显的剂量依赖性(P＜0.05).与5-Aza处理组相比,5-Aza+CdC12处理组L02和HepG2细胞中PPP2R1A mRNA均略降低,但差异无统计学意义.甲基化测序发现,对照组和CdC12处理组L02细胞中PPP2R1A基因启动子区CpG岛甲基化比例分别为2.3％和4.2％,在HepG2细胞分别为3.8％和5.0％.结论：外源化学物CdCl2可诱导肝细胞中PPP2R1A基因转录水平降低,可能与镉能够引起目的基因启动子区甲基化状态改变有关.提示PP2A亚基基因的表观遗传学调控可影响镉诱导的肝细胞功能.
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