S100A4和S100A6在成骨诱导分化和破骨诱导分化中表达及意义

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目的:探索S100A4和S100A6在MC3T3-E1细胞成骨分化和RAW264.7细胞破骨分化中表达及意义。方法:将MC3T3-E1细胞分成成骨诱导组(诱导液:10-8M地塞米松、50ug/ml维生素C、10mMβ-甘油磷酸)和对照组(未加诱导液),按1×105/ml密度接种到6孔板上,分别培养3天、7天、14天和21天时;检测各时间点的茜素红染色和碱性磷酸酶染色情况;同时提取细胞总RNA,通过RealTime RT-PCR的方法检测S100A4、S100A6、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)及核因子-κβ受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达情况。RAW264.7在含有破骨细胞分化诱导液(50ng/ml RANKL和25ng/ml M-CSF)的培养基中培养0天、1天、3天和5天时,进行破骨诱导分化过程中耐酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测,同时收集各时间点细胞,通过RealTime RT-PCR的方法检测S100A4、S100A6及TRAP mRNA等表达情况。结果:1、成骨诱导组的ALP染色从3天、7天、14天时表达逐渐增强趋势,而到21天时曾减弱趋势;对照组中ALP阴性。MC3T3-E1细胞诱导3天和7天时未出现钙结节,14天时出现散在较小不典型结节,21天时出现数量较多以及直径较大典型钙结节;对照组仅在21天时出现很少散在较小结节。RAW264.7细胞破骨分化过程中耐酒石酸酸性磷酸酶活性逐渐增强。2、与未加诱导液组作为对照,MC3T3-E1细胞诱导3天、7天和14天时,S100A4和RANKL mRNA表达逐渐减弱,而诱导21天时S100A4和RANKL mRNA表达比14天时要增加,但S100A4仅在3天和21天有统计学意义(P<0.05);S100A6 mRNA表达在诱导7天和14天时较低,在3天和21天时表达逐渐较高,但仅在S100A6在3天和21天有统计学意义(P<0.05);ALP mRNA在3天、7天和14天时表达逐渐增加,而21天时较14天时减弱;OPG mRNA表达逐渐减弱。OPG、RANKL和ALP在各时间段均有显著性差异(P<0.05)。3、随着RAW264.7细胞逐渐分化,TRAP mRNA表达逐渐增加,S100A4 mRNA表达逐渐增加,S100A6 mRNA表达逐渐下降。经统计学分析后,与0天时相比,S100A4和TRAP在3天和5天出现显著性差异(P<0.05),而S100A6在1天和3天出现显著性差异(P<0.05)。结论:S100A4和S100A6参与调节MC3T3-E1细胞增殖期和成骨诱导分化晚期。S100A4参与调节RAW264.7细胞诱导分化晚期。S100A6参与调节RAW264.7细胞诱导分化早期。
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