梯度pH共沉淀法回收人工肝丢弃血浆蛋白

来源 :第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zyu03
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  目的:有选择地快速回收人工肝置换下来的病人血浆中多种蛋白,以期用于自体回输治疗。方法:我们设计了一种梯度pH共沉淀法(从pH7.3开始,逐滴加入1mol/L柠檬酸溶液,5h加完,使溶液pH值呈渐进梯度变化,至终点pH5.1),用此法配合盐析法(NaCl饱和度33%,4℃反应5.5h:)或低温乙醇沉淀法(乙醇浓度40%,-7℃反应5.5h),使等电点在pH7.3~5.1范围内的各蛋白连环碰撞聚集而析出,形成多蛋白共沉淀,再一饼回收,弃上清液以清除毒物。结果:在pH7.3~5.1范围内,本文用梯度pH低温乙醇法和梯度pH盐析法分别回收了41%(25/61 g/L)和50%(29/57 g/L)的血浆蛋白,上清液中未回收的蛋白主要是白蛋白(及所结合的胆红素)。两法回收的蛋白溶液中,总胆红素分别下降了13倍(低温乙醇法)和16倍(盐析法),HBV DNA降为阴性(PCR定量)。结论:在高浓度中性盐或低温乙醇条件下,渐进微调溶液pH值,可使一连串有相邻等电点的蛋白共沉淀,由此可用本文的梯度pH共沉淀法选择性快速回收人工肝丢弃血浆中总蛋白以便用于自体回输治疗。
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