目的:构建变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株,观察其体外形成生物膜的能力,为进一步明确GbpD蛋白的功能提供重要信息。方法:PCR扩增变链菌gbpD基因内部序列,连接T载体后测序,再将该内部片段定向插入自杀载体 pVA8912,转化变链菌UA159构建gbpD基因插入失活突变株,利用PCR结合酶切及western-blot鉴定。将gbpD基因失活菌和野生菌在96孔酶标板中厌氧培养48 h,黏附菌使用结晶紫溶液染色,乙醇／丙酮混合液显色,测量OD575值,以定量反映生物膜形成量。以无菌唾液包被釉质片后分为2组,分别与gbpD基因失活菌和野生菌共同厌氧孵育48h,扫描电镜观察釉质片表面形成的生物膜的形态。结果:gbpD失活株的基因组中gbpD基因内部成功插入了外源载体片段,该菌株不表达GbpD蛋白。gbpD 基因失活株生物膜形成量OD值(0．30±0．10)显著低于野生菌(0．59±0．27);扫描电镜发现野生菌的生物膜厚而致密,菌细胞排列规则;突变株的生物膜结构菲薄,菌细胞排列紊乱,存在很多空隙,可见长链状排列的菌细胞。结论:gpD的基因失活对变形链球菌的生物膜形成产生影响,推测GbpD蛋白可能与变形链球菌生物膜形成能力和生物膜结构有关。