【摘 要】
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目的 建立活细胞标记G 蛋白偶联受体(GPCR)的方法,采用荧光寿命成像(FLIM)结合荧光共振能量转移(FRET)分析GPR17(一种P2Y/CysLT 受体)同源二聚体相互作用。方法 建立基于切割绿色荧光蛋白(split GFP,sGFP)的GPCR 标记方法,以sGFP 分别标记到GPR17 细胞外3 个loop,或以GFP 融合到GPR17 的N 端或细胞内第3 个loop,以mcherr
【机 构】
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中国科学院武汉物理与数学研究所,湖北武汉430071 浙江大学医学院药理系,浙江杭州310058
【出 处】
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第十七届全国神经精神药理学学术会议
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目的 建立活细胞标记G 蛋白偶联受体(GPCR)的方法,采用荧光寿命成像(FLIM)结合荧光共振能量转移(FRET)分析GPR17(一种P2Y/CysLT 受体)同源二聚体相互作用。方法 建立基于切割绿色荧光蛋白(split GFP,sGFP)的GPCR 标记方法,以sGFP 分别标记到GPR17 细胞外3 个loop,或以GFP 融合到GPR17 的N 端或细胞内第3 个loop,以mcherry 融合到GPR17 的N 端或细胞内第3 个loop,以sGFP 或GFP 作为FRET 的供体,以mcherry 作为FRET 的受体,采用FLIM-FRET 方法分析不同标记供体和受体之间的绝对距离,基于距离约束,使用结构预测软件ITASSER预测获得GPR17 单体的结构,然后使用Xplor-NIH 基于距离约束和单体结构,进一步计算研究GPR17 同源二聚体之间的相互作用。
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