椎间盘退变体外模型的建立及髓核诱导种子细胞的研究

来源 :中国康复医学会颈椎病专业委员会第二届全国中青年颈椎病专题论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxf13098900158
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  目的:本研究采用GFP转基因小鼠椎间盘体外培养,观察不同时间点椎间盘内细胞和细胞外基质的变化,建立椎间盘退变的体外模型;髓核组织与间充质干细胞 (MSCs)联合培养,观察髓核组织对MSCs分化的影响,探讨MSCs是否向髓核样细胞分化,可否作为种子细胞用于椎间盘退变的组织工程修复。方法:GFP转基因小鼠椎间盘体外培养,每天荧光显微镜下观察细胞数目和分布的变化,1,7,10,50天椎间盘组织包埋、切片、HE染色、甲苯胺兰染色观察椎间盘结构和细胞外基质的变化;细胞培养采用新西兰白兔椎间盘髓核组织和MSCs培养于DMEM培养基,添加10%热灭活胎牛血清,100U/ml的青霉素和链霉素、2mM左旋谷氨酞胺,37℃放置在含5% C02的培养箱中,每3天更换培养基。新鲜的髓核组织和培养1个月的髓核组织分别和MSCs联合培养,在培养板中,髓核组织和MSCs直接接触,观察MSCs的形态学变化,RT-PCR法检查Ⅰ/Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA表达的变化。结论:体外培养椎间盘出现明显退变,可作为一种退变模型用于研究,同时下一步继续深化体外培养椎间盘的生化和细胞因子方面的变化。共培养MSCs和髓核组织可诱导MSCs向髓核样细胞分化,这作为一种新的方法,产生大量髓核样细胞,为以细胞为基础的髓核的组织工程方法修复退变椎间盘提供思路和方法。
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