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研究背景:天然免疫,尤其是Toll样受体(包括TLR2、TLR3、TLR4等)介导的免疫反应在类风湿关节炎 RA发病中发挥重要的作用。研究表明, RA病人滑膜组织长期处于缺氧状态。越来越多的数据证实,应激反应和TLR信号通路存在着相互作用和联系。作为最古老和经典的应激反应之一,缺氧与TLR介导的免疫反应存在怎样的联系以及其在 RA发病中发挥怎样的作用值得深入探讨。目的:本研究旨在探讨缺氧对TLRs介导的免疫反应的作用,揭示其在 RA发病中的作用,使 RA的发病机制在分子水平上有新的认识。方法:在体外分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 RASF。首先,利用连二亚硫酸钠Na2S2O4诱导缺氧环境,然后给予各种TLR激动剂(包括TLR3、TLR2、TLR4以及TLR9激动剂)刺激,通过 RT-PCR、realtime PCR以及ELISA的方法检测缺氧对TLR激动剂刺激 RASF产生炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α以及MMPs、VEGF的影响;其次,通过质粒超表达和siRNA敲减的方法揭示缺氧诱导因子HIF-1α在这一过程中的关键作用;再次,在 RASF中超表达HIF-1α,然后与 RA病人T细胞共孵育,通过FACS、realtime PCR以及ELISA的方法检测其对T细胞的扩增作用以及对Th1和Th17细胞的诱导作用。结果:(1)连二亚硫酸钠Na2S2O4在 RASF中可以成功诱导缺氧。在此缺氧条件下,TLR激动剂,尤其是TLR3激动剂poly IC可以刺激 RASF产生更多的炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α以及MMPs、VEGF。(2)上述协同作用依赖于缺氧诱导因子HIF-1α:在 RASF中超表达HIF-1α可以明显地促进poly IC引起的炎性细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的分泌;利用siRNA敲减 RASF中HIF-1α的表达可以抑制缺氧对poly IC诱导炎性细胞因子分泌的协同作用。(3)高表达HIF-1α的 RASF可以更加明显地促进 RA患者T细胞的扩增以及其向Th1和Th17细胞的分化。结论:缺氧及缺氧诱导因子HIF-1α可以促进类风湿关节炎中TLR信号通路介导的炎症反应,在 RA发病中发挥重要的作用。抗HIF-1α靶向治疗有望成为新的 RA治疗策略。