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目的 引起类风湿关节炎(RA)的直接原因不清.许多研究证实RA滑液或血清中某些抗微生物抗体水平增高,但从RA病变关节分离出病原微生物,或因实验中的污染或因实验结果的不可重复而不能确认.关于参与RA自身免疫异常机制的研究表明,微生物抗原通过与自身抗原的分子模拟、激活自身隐蔽性抗原表位及参与表位扩展对关节炎的有诱发作用.参与启动RA的外来或自身抗原颇为人们关注.本研究噬菌体随机多肽筛选获得的RA相关多肽核心序列与QKRAA序列进行生物信息学的分子对接分析,优化确定亲和肽,并在体外对其特异性抑制免疫活化作用进行了初步研究.材料和方法 首先用SDS PAGE和ELISA法分析了RA、AS、ReA及OA等不同关节炎滑液IgG水平,发现不同关节炎滑液中均有较高水平IgG,而以RA升高最为明显;进而采用葡萄球菌A蛋白层析柱分离纯化了混合的RA、AS、ReA及OA等不同关节炎滑液IgG多抗.以此为固相配基,选取NNK方式编码的十五肽噬菌体随机文库,经3轮筛选得到14个与RA滑液和血清特异性结合克隆,并对阳性克隆进行核心序列和同源性分析.采用ELISA,同时对其中3株高亲和性克隆进行结合和竞争抑制实验.采用InsightⅡ(95.5)软件包中Docking、 Builder及Discover程序分析"QRRAA"与"SR" "APRV" "RVS"间的相互作用.斑点试验证实,含有核心序列的目的多肽与QRRAA的结合状态.结果 携带HLA-DR4的个体具有对RA的易感性.HLA-DR4有至少14种亚型.与RA相关联的DR4亚型的b链第三高变区的氨基酸具有较高的遗传保守性.与类风湿关节炎的明显相关的DR表型第三可变区71-74位氨基酸均为QK(R) AA.从HLA-DR分子的主体结构看,该区氨基酸恰好构成由b链螺旋形成的"分子袋"侧壁的一部分.该"分子袋"即MHC分子的抗原结合位点.结果表明,APR、RVS及RYXC为与RA滑液抗体特异性结合多肽的核心序列,pRA33 (ESETAPRYRCENQPS)、pRA39 (QNCRVSRCGPEIBWI)及pRA16 (EAGLTLPDRYSCBPT)与前胶原、糖蛋白多肽、Ⅰ型疱疹病毒蛋白、酪蛋白激酶Ⅱ及干扰素调节蛋白等自身或外来蛋白具有较大同源性.QRRAA与SR可形成三键低能稳定结构.QRRAA与APRV、RVS未能形成低能稳定结构.高亲和性克隆pRA33、pRA39及pRA16可明显抑制滑液中抗原与滑液抗体的结合反应.对混合滑液以外的RA滑液反应阳性率分别为97.6%、88.5%和94%,对RA血清结合反应阳性率分别为68.5%、55%和62.3%.斑点试验结果提示含GHSHHWWHRFSLN和GPHHWHQKVTGK的噬菌体能够和QRRAA相结合,表明HWH三个连续氨基酸,很大可能是它们与QRRAA作用,导致两种不同的肽段都能与QRRAA结合.含有核心序列的多肽在体外可以抑制免疫细胞的活化.结论 本研究结果提示噬菌体多肽呈现技术使寻找未知结构抗原多肽成为可能.所获得的与RA特异性反应多肽,为探索RA病因及发病机制,进一步发展RA早期诊断方法及针对性治疗奠定了基础.