【摘 要】
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目的:应用基因芯片技术,分析卷烟烟气CSC诱发永生化人支气管上皮细胞BEP2D发生恶性转化不同阶段的基因表达谱变化。方法:用卷烟烟气CSC对永生化人支气管上皮细胞BEP2D进行染毒。用软琼脂克隆及流式细胞术对染毒不同代龄细胞的恶性转化性状进行检测,分离培养已发生恶性转化的软琼脂克隆细胞。分别提取染毒不同代龄细胞的总RNA,选用人类全基因组寡核苷酸芯片Sentrix(r)Humzn-6 Exprea
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所 北京 100850
【出 处】
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中国环境诱变剂学会第13届学术交流会暨中国环境诱变剂学会青年学术交流会
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目的:应用基因芯片技术,分析卷烟烟气CSC诱发永生化人支气管上皮细胞BEP2D发生恶性转化不同阶段的基因表达谱变化。
方法:用卷烟烟气CSC对永生化人支气管上皮细胞BEP2D进行染毒。用软琼脂克隆及流式细胞术对染毒不同代龄细胞的恶性转化性状进行检测,分离培养已发生恶性转化的软琼脂克隆细胞。
分别提取染毒不同代龄细胞的总RNA,选用人类全基因组寡核苷酸芯片Sentrix(r)Humzn-6 Expreassion Bead Chip,通过芯片的杂交、清洗及扫描,对染毒不同代龄细胞的基因表达谱进行分析。
结果:用CSC对BEP2D细胞染毒后,从P30代开始,细胞获得了锚着独立生长特性,流式细胞术显示,P40代细胞出现多倍体。我们从软琼脂克隆中分离出具有恶性转化特性的细胞C2。分别对染毒后小同代龄细胞P10、P20、P30、P10及C2进行基因芯片分析显示:与洒精对照细胞相比,CSC染毒后,在P10、P20、P30、P40及C2中均表达下调的基因有269个,表达上调的基因有63个,这些基因的改变发生在CSC诱发BEP2D细胞恶性转化的早期阶段,与癌启动相关。CSC染毒后,P10、P20表达没有变化,而在P30、P40及C2巾发生表达下调的基因有316个,表达上调的基因有147个,这些基因的改变发生在CSC诱发BEP2D细胞恶性转化的中期,与癌促进相关。
结论:应用基因表达谱芯片成功分析了CSC诱发BEP2D细胞恶性转化不同阶段的基因表达谱,筛选出一批与癌症的启动及发展阶段相关的基因,为深入了解吸烟致肺癌的发生、发展机理提供了有价值的信息,同时也为最终制备出一张吸烟致肺癌相关基因的检测芯片打下基础。
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