【摘 要】
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目的为柯萨奇病毒A6、A10型引起的手足口病疫情提供快速准确的检测。方法运用一步法双重实时荧光定量RT-PCR,采用柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型高度特异的引物和荧光标记
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院检验科分子实验室;
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目的为柯萨奇病毒A6、A10型引起的手足口病疫情提供快速准确的检测。方法运用一步法双重实时荧光定量RT-PCR,采用柯萨奇病毒A6型和柯萨奇病毒A10型高度特异的引物和荧光标记探针,在同一个反应管内检测患者粪便标本中柯萨奇病毒A6、A10型的核酸。结果成功建立了柯萨奇病毒A6、A10型的RT-PCR检测方法和定量标准曲线。实验结果表明,本检测方法特异性强,与其他肠道病毒如肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型、柯萨奇病毒A2型、柯萨奇病毒A5型、柯萨奇病毒B1型、柯萨奇病毒B3型、埃克病毒30型,及甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、博卡病毒的阳性核酸均无交叉反应;该方法检测灵敏度高,分别达到102、102copies/ml;对已标定拷贝数(copies/ml)的柯萨奇病毒A6型合成片段(107copies/ml)和柯萨奇病毒A10型合成片段(107copies/ml)分别稀释后对每一个指定浓度的阳性核酸稀释液进行重复性实验,变异系数均低于1.38%。结论本方法能同时对A6、A10型柯萨奇病毒进行快速检测,且灵敏度高、特异性强、重复性好,并可应用于柯萨奇病毒A6、A10型引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及手足口病的流行病学的研究。
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