骨髓间充质干细胞(MSCs)因具有多向分化潜能、免疫耐受、取材方便、自我更新等特点而成为组织工程重要的种子细胞及近年来研究的一个热点。本课题的前期研究表明高频脉冲电磁场促进髓间充质干细胞的凋亡,但其机理尚不清楚,蛋白质组学是指研究和鉴定一个细胞、器官、组织在一特定时间所表达的总蛋白质的过程,蛋白质组学研究的兴起,为我们从蛋白质水平研究高频脉冲电磁场促进髓间充质干细胞的凋亡的机理奠定了基础。目的 1.利用双向电泳技术(2-DE)创建体外正常培养的和高频脉冲电磁场干预培养的骨髓间充质干细胞蛋白表达图谱。2.利用图像分析软件对蛋白表达图谱进行对比分析查找差异蛋白点,经质谱鉴定后找出高频脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞的凋亡有关的功能蛋白,探讨功能蛋白的作用机制。方法 1.用全骨髓贴壁法进行体外分离,培养,传代,纯化骨髓间充质干细胞,取P3代作为研究的靶细胞。2.以1×106/cm2密度接种至底面积100 cm2培养瓶,分为A、B两组进行培养,A组为高频脉冲电磁场干预组,B组为对照组。3.分别提取A、B两组细胞总蛋白,纯化蛋白样本,Bradford法进行蛋白定量,进行双向电泳,获取A、B两组双向电泳图谱并进行对比分析,查找差异蛋白点。切取蛋白差异点、酶解,进行质谱鉴定,根据质谱鉴定结果进行数据库检索查找功能蛋白。结果 1.获得分辨率和重复性较好的正常培养的和高频脉冲电磁场干预培养的骨髓间充质干细胞蛋白表达图谱。2.用图像分析软件对蛋白表达图谱进行对比分析出差异蛋白点19个,其中17个蛋白点在A组表达量上升,2个表达量下降,经质谱成功鉴定11个,其中EF-hand domain-containing protein D2(又称Swiprosin-1),有促进细胞凋亡作用。结论利用双向电泳技术(2-DE)创建了正常培养的和高频脉冲电磁场干预培养的骨髓间充质干细胞比较理想的蛋白表达图谱;EF-hand domain-containing protein D2可能是高频脉冲电磁场促进BMSCs凋亡的一个功能蛋白。