桃树根癌病是由根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)引起的一种细菌性病害,可侵染多种果树及其他植物。由于根癌病菌能在土壤中存活数年,而且侵染植物后便很难控制,因此加强土壤中病原菌的监测并实现桃根癌病的早期诊断,将为该病害的预防和控制提供重要依据。本研究根据根癌土壤杆菌C58菌株T-DNA中异戊烯基转移酶ipt基因片段设计6对引物,通过引物特异性及敏感性比较,获得适用于根癌土壤杆菌定量检测的特异性引物ipt3F/ipt3R。应用该引物,从致病菌ATCC23308基因组DNA,扩增获得247bp的特异性扩增片段,其序列与GenBank中A.tumefaciens同源性达到98%。将该片段与pMD19-T载体连接后,以重组质粒作为标准品,制备了根癌土壤杆菌的实时荧光定量PCR的质粒标准曲线,建立了土壤中根癌土壤杆菌的荧光定量检测方法。当土壤中根癌土壤杆菌含量在3.8×10~2～3.8×10~7cfu/g时,菌含量与DNA拷贝数呈线性关系,相关系数达0.98以上。以此方法对河北和山东部分地区土壤样品的检测,结果表明,发病较重的苗圃土壤病原菌含量达10~4cfu/g,重茬苗圃地土壤中病原菌的含量明显升高,可达10~6cfu/g,前茬为玉米或杂草的土壤中病原菌的含量低于检测下限。上述结果为桃根癌病的发生预测提供了方法,具有重要的实际意义。