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目的:以VEGFR-3为靶点,克隆小鼠VEGFR-3胞外区基因片段,构建重组质粒pcDNA3.1-VR-3,以减毒沙门氏菌SL3261为载体,制备口服VEGFR-3 DNA疫苗,研究其抑制肿瘤血管和淋巴管生成的作用和机制,观察其对小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的免疫治疗效果.方法:1、提取C57BL/6胎鼠总RNA,采用RT-PCR技术,克隆小鼠VEGFR-3胞外区cDNA全长序列.以质粒pcDNA3.1为载体,构建重组质粒pcDNA3.1-VR-3,经脂质体介导转染COS-7细胞,Western blot检测其蛋白表达;2、将pcDNA3.1-VR-3分别转化感受态减毒沙门氏菌SL3261,制备以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗,免疫C57BL/6小鼠,动态观察血中特异性抗体水平、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤活性,检测疫苗的免疫生物学活性;3、在口服DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤血管和淋巴管生成作用的实验研究中,选30只C57BL/6小鼠随机分为联合疫苗组、空质粒组和生理盐水组,两周内各口服三次;最后一次接种结束2周后,3LL细胞皮下接种,建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,记录移植瘤生长情况、体积、湿重;分别于接种疫苗前、后以及接种3LL细胞后,采用流式细胞术测小鼠外周血CD3+和CD8+值;接种3LL细胞28天后处死全部小鼠,取出肿瘤,称重,拍照,测体积,并进行组织病理学检查,免疫组织化学法计数肿瘤微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(LVD),研究疫苗对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用;结果:1、克隆了VEGFR-3胞外区cDNA全长序列,并构建了重组质粒pcDNA3.1-VR-3,Western blotting证实目的基因可在COS-7细胞中表达;2、成功制备了以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗.疫苗组的抗体水平和空质粒组、生理盐水组比较,均有明显差异(P<0.05);特异性细胞毒性T淋巴细胞体外杀伤活性实验结果显示:效靶比为10∶1时,疫苗组小鼠脾淋巴细胞对MS1的杀伤率和对照组之间没有明显差异(P<0.05),但是随着效靶比的逐渐增加,疫苗组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤率逐渐增高,空质粒组和生理盐水组没有明显变化,当效靶比为80∶1时,疫苗组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤率高于空质粒组和生理盐水组(P<0.05).3、口服DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤模型血管和淋巴管生成作用的实验研究结果表明:疫苗组的肿瘤重量、体积、微血管密度和微淋巴管密度与空质粒组和(或)生理盐水组比较,均有统计学意义(分别P<0.05);而空质粒组的肿瘤重量、体积和微血管密度与生理盐水组比较,无统计学意义(P>0.05).结论:成功制备了以VEGFR-3为靶点的口服DNA疫苗;该疫苗能激活机体特异性的体液免疫及细胞免;该疫苗能通过抑制肺癌血管生和淋巴管生成而抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的生长,抑制原位肺癌模型和肺转移瘤模型肺癌的生长和转移;该疫苗能延长Lewis肺癌模型小鼠的生存时间.