鸽呼吸道和消化道黏膜上皮细胞表面流感病毒受体类型的检测

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引言:流感病毒颗粒通过其脂质膜上血凝素蛋白(HA)的球形受体结合位点与宿主细胞膜上带有唾液酸残基的糖蛋白和糖脂相结合附着于细胞表面。唾液酸的末端与半乳糖可以形成两种不同的α连接,分别是SAα2,3Gal和SAα2,6Gal。禽流感病毒和马流感病毒主要识别和结合SAα2,3Gal连接键,而人流感病毒主要识别和结合SAα2,6Gal的连接键。唾液酸-半乳糖连接键型的不同是流感病毒在不同宿主间传播的屏障。鸽子是否对禽流感病毒易感,是否有传播禽流感病毒的潜在危险,一直是科学界争议的话题。检测鸽体内禽流感病毒受体类型可以初步判定鸽是否具有感染禽流感病毒的生理基础,具有重要的意义。材料和方法:8周龄鸽的10%福尔马林固定组织,地高辛聚糖鉴别诊断试剂盒;通用碱性磷酸酶酶联检测封闭溶液;TBS缓冲液pH 7.5。制作组织切片。使用地高辛标记的外源性凝集素和碱性磷酸酶标记的抗地高辛的二抗依次与组织反应,最后NBT/BCIP染色,苏木素复染。显微镜下观察,上皮细胞表面为深蓝黑色判为阳性。结果与讨论:8周龄鸽的喉头、气管上段、气管中段、气管下段肺脏初级支气管的黏膜层上皮细胞表面只有SAα2,6Gal,而没有SAα2,3Gal;而三级支气管和肺房上皮细胞表面SAα2,6Gal和SAα2,3Gal都没有;鸽直肠黏膜上皮细胞表面只有SAα2,3Gal。鸽喉头、气管、肺内支气管、三级支气管和肺房壁上皮细胞表面都不存在禽流感病毒的受体(SAα2,3Gal),进入鸽呼吸道内的H5N1亚型禽流感病毒粒子的HA找不到适合的受体相结合,病毒就不能吸附在其呼吸道上皮细胞表面,也就不能进入细胞而感染细胞,这解释了H5N1亚型禽流感病毒进入鸽体内后,并不能够在鸽体内存活、复制和增殖、从而不能够导致鸽发病或者死亡的原因。
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