目的 硫化氢被认为是第三种气体信号分子,在神经系统中扮演重要的角色。脑内合成硫化氢的主要酶为胱硫醚-β-合成酶(CBS),因此研究CBS与神经系统疾病的关系具有重要意义。利用基因重组技术,构建CBS基因过表达载体,转染PC12细胞,建立CBS过表达的PC12细胞株并进行鉴定。方法 根据Gene bank提供的CBS cDNA序列设计引物,PCR扩增CBS基因并将其慢病毒过表达载体GV341,将已构建的慢病毒载体对293T细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常PC12细胞,用嘌呤霉素进行筛选,得到稳定转染CBS的PC12细胞。通过基因测序,实时荧光定量PCR、western-blot等对细胞株进行鉴定。结果 测序鉴定重组慢病毒过表达载体CBS基因序列与genebank提供的CBS序列一致；荧光定量PCR和western-blot检测显示,与空载体组相比,转染GV341-CBS慢病毒表达载体组的PC12细胞,CBS的表达在mRNA和蛋白两个水平均增高,成功建立了PC12-CBS细胞系。结论 成功构建CBS过表达的PC12细胞株,为研究CBS与神经系统疾病的关系提供了稳定的细胞株。