【摘 要】
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目的：探讨在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH23UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平,为后期动物实验和临床试验提供实验基础.方法：首先利用实时定量PCR技术,检测HBL-100、MCF-7和MDA-MB-231三株人乳腺上皮细胞系中miR-217和EZH2转录后表达水平;利用Western blot技术检测三株细胞系中EZH2蛋白表达水平;筛选用于"过表
【机 构】
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苏州大学医学院 上海市奉贤区中心医院检验科
【出 处】
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第一次全国中西医结合检验医学学术会议
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目的：探讨在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1与EZH23UTR调控DNMT1及EZH2转录后表达水平,为后期动物实验和临床试验提供实验基础.
方法：首先利用实时定量PCR技术,检测HBL-100、MCF-7和MDA-MB-231三株人乳腺上皮细胞系中miR-217和EZH2转录后表达水平;利用Western blot技术检测三株细胞系中EZH2蛋白表达水平;筛选用于"过表达、抑制miR-217实验"的细胞.然后利用瞬时转染技术,在低表达miR-217细胞中,转染miR-217模拟物;在高表达miR-217细胞中,转染miR-217抑制物,进行miR-217的过表达、抑制实验.最后,将含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1及EZH23UTR质粒载体,分别转染293T细胞,检测其相对荧光素酶活性的改变.
结果：RT-PCR结果显示,与正常乳腺上皮细胞系HBL-100比较,EZH2在乳腺癌上皮细胞系MCF-7和MDA-MB-231中显著高表达(P＜0.05);而miR-217显著低表达(P＜0.05).Western blot检测结果显示,EZH2在正常乳腺上皮细胞系HBL-100中低表达,乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231中高表达.三阴性乳腺癌上皮细胞系MDA-MB-231中过表达miR-217,DNMT1和EZH2蛋白表达下降;乳腺上皮细胞系HBL-100中抑制miR-217表达,DNMT1和EZH2蛋白表达增高.293T细胞中检测海肾和荧火虫两种荧光素酶活性,双荧光素酶检测结果显示,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT(P＜0.05),具有统计学意义;EZH2-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于EZH2-UTR-MUT(P＜0.05),具有统计学意义.
结论：在人乳腺癌上皮细胞系中,miR-217下调DNMT1及EZH2蛋白表达,且通过直接作用于DNMT1、EZH23UTR下调其表达.
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