【摘 要】
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根据迟缓爱德华氏菌165 rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法.通过所构建的16S rRNA质粒标准品核酸拷贝数(C/5,x)的对数值与其对应Ct值(y)的相关性,分析得到FQ
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,上海201306 中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛26607
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根据迟缓爱德华氏菌165 rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法.通过所构建的16S rRNA质粒标准品核酸拷贝数(C/5,x)的对数值与其对应Ct值(y)的相关性,分析得到FQ-PCR的标准曲线：y=-3.2798x+39.635 (R2=0.9989).以标准质粒为模板,进行灵敏度实验及批内与批间分析,结果表明其检测极限可达到50copies,较常规PCR高100倍,在5×10～5×100copies/ul范围内批内与批间变异系数(cv)分别为0.20～2.10％、0.06～1.78％,证实其重复性较好.特异性检测中该方法与6种海水弧菌均无交叉反应.研究结果表明,该方法灵敏,特异、准确、重复性良好且能实现迟缓爱德华氏菌的定量检测,对迟缓爱德华氏菌的临床检测和疫情监测具有重要意义.
其他文献
早期的研究中,我们报道了从冬季和夏季鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)的快速肌中分离到两种肌球蛋白重链同工型基因,分别命名为低温型(sc-w)和高温型(sc-s).本文根据该两种同工型基因在3 ′端展现的明显差异,设计了2个特异性的反向引物,以鲤科鱼类肌球蛋白重链5′端的保守序列为正向引物,通过Long-PCR对编码鲢鱼两种肌球蛋白重链同工型的球状结构域(Subfrag
采用每4个雄性亲本与1个雌性亲本交配的巢式设计方法,建立哲罗鲑(Hucho taimen)9组母系半同胞、34个父系全同胞家系,19个家系置于(13±1.5)℃(高温)、15个家系置于(9±1.5)℃(低温)条件下饲养,计算幼鱼各月龄的体质量和体长性状的遗传力和遗传相关.结果表明,哲罗鲑幼鱼在低温条件下体质量遗传力为0.413～0.675,体长遗传力为0.297～0.777,高温条件下体质量遗传力
实验测定了两种规格(27.0±2.0、12.0±2.0g)野生克氏原螯虾的肌肉生化成分、消化酶和免疫酶活性等.结果表明：大规格虾的肌肉以及除肌肉外其它部分的能量均高于小规格虾,肌肉中天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸的含量均高于小规格虾；肝胰脏和肠道内蛋白酶、淀粉酶活力随pH值的增大均呈现先上升后下降的规律变化,两种规格虾肠道中蛋白酶和淀粉酶以及小规格虾肝胰脏中淀粉酶的最适pH均为7.2,而小规格虾肝胰脏中
向短蛸(Octopus ocellatus)血淋巴中加入不同浓度的甲硫氨酸脑啡肽(met-Enkephalin,met-ENK)后,采用生化方法测定了短蛸血清和血细胞中酸性α-醋酸萘酯酶(α-Naphthy Acetate Esterase,ANAE)和甲硫氨酰氨肽酶(methionineaminopeptidases,MetAP)的活力.结果表明：实验组血清ANAE活力均低于对照组,ANAE活力
研究已证实杆状病毒可以进入各种脊椎动物细胞,包括哺乳动物细胞,禽类细胞,以及鱼类细胞。由于杆状病毒能高效转导哺乳动物细胞,在疫苗研究,基因治疗,以及基因功能研究方面都有一定应用,现已成为一种新型的基因导入载体。然而研究发现,杆状病毒转导鱼类细胞系效率低下,这就阻碍了杆状病毒在鱼类细胞中 的应用。本研究构建了重组杆状病毒Bac-CMV-EGFP,以CMV为启动子,EGFP为报告基因。用重组杆状病毒转
2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验,结果发现攻毒鱼大量死亡且出现典型出血症状
从近海区生态环境样品分离纯化的98株微生物中,用根癌农杆菌平板筛选模型经过初筛和复筛,筛选出具有细菌群体感应干扰活性的微生物细菌ZD 27,并对其进行形态、生理生化特性和16S rDNA分子鉴定,在此基础上考察其水解酶活特性和热稳定性。结果显示,该菌株具蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的典型特征,其16S rDNA序列通过比对分析,与GenBank中蜡样芽孢杆菌的16S rDNA的部
一株从锯缘青蟹中分离的呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus,简写为SsRV),基因组为13个节段的双链RNA.通过电子显微镜观察结果表明：完整的病毒粒子直径为70nm,与呼肠孤科其他已知病毒粒子大小一致.由于经过蔗糖密度梯度纯化,病毒粒子失去外层衣壳,直径约为55nm(比其他呼肠孤科的完整病毒粒子略小).病毒粒子形态和基因序列分析证明SsRV属于呼肠孤病毒科.SsRV RNA
呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原体,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP6蛋白由S8基因片段编码,NS38蛋白是由S9片段编码.VP6蛋白在病毒的转录与复制及病毒核衣壳的形成中起重要作用,且有弱的dsRNA结合能力,且其中和效价强.本研究提取了GCRV 096病毒的基因组RNA,通过RT-PCR扩增vp6和NS38两个基因,获得了其全基因
造血组织在甲壳类动物的免疫防御中起着非常重要的作用,而Astakine是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖的细胞因子.研究证实WSSV选择BP53 (ATP合酶β亚基)作为侵染宿主的靶点,在淡水螯虾中发现BP53作为Astakine的受体参与了细胞分化.因此WSSV、BP53、Astakine之间存在着一定的联系.本实验主要针对WSSV、BP53、astakine三者之间进行研究.应用反转录聚合酶