【摘 要】
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本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似基因(Zinc Transporter 7-like,ZnT-7-1ike),制备ZnT-7-1ike多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况.
【出 处】
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第十届海峡两岸蜜蜂与蜂产品学术研讨会暨首届全国蜂产业高峰论坛
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本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似基因(Zinc Transporter 7-like,ZnT-7-1ike),制备ZnT-7-1ike多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况.运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-1ike基因,经过生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273bp)作为多肽免疫序列.将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western Blot技术检测该基因在不同日龄王浆腺中的相对表达量.结果,克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因,大小为1065 bp;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1:64000,且具有很高的特异性:该基因在卡尼鄂拉蜂5个日龄中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄最高,12日龄最低;ZnT-7-1ike蛋白表达与转录水平基本一致.成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-1ike多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-1ike在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量,为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因的功能奠定了基础.
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