【摘 要】
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本研究提取植物乳杆菌C88基因组DNA,通过PCR扩增获得了甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因全长序列,双酶切后插入到大肠杆菌表达
【机 构】
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吉林省农业科学院农产品加工研究所/国家乳品加工技术研发分中心,长春130033
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本研究提取植物乳杆菌C88基因组DNA,通过PCR扩增获得了甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因全长序列,双酶切后插入到大肠杆菌表达载体pET28a中,构建表达载体GAPDH-pET28a,转化大肠杆菌BL21,获得重组大肠杆菌BL21-pET28a/GAPDH,经过IPTG诱导表达,SDS中AGE分析证明重组GAPDH的分子量约为40 kDa,重组蛋白在细胞中以包涵体的形式存在,经过超声波破碎,尿素重溶,透析脱盐后上柱纯化,获得了纯化的GAPDH重组蛋白.通过体外Caco-2细胞黏附试验验证,GAPDH重组蛋白能够黏附在Caco-2单层细胞的表面、形成占位,从而阻碍了病原菌对Caco-2细胞的黏附(P＜0.05).
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