甘蔗响应黑粉菌(Ustilago scitaminean Syd.)侵染的表达谱分析与差异表达基因鉴定

来源 :中国植物病理学会2012年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gj1019
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  由黑粉菌(Ustilago scitaminean Syd.)引起的甘蔗黑穗病是一种重要的世界性病害,也是我国最重要的甘蔗真菌病害之一,感病品种蔗茎产量和蔗糖分损失严重,培育抗黑穗病品种是控制该病害最有效的措施.本研究以含有斑茅血缘、高抗黑穗病的甘蔗无性系Ya05-179为材料,首次应用Sloexa高通量测序技术,在比较分析甘蔗黑穗病菌胁迫前后甘蔗幼芽RNA表达谱的基础上,获得了2 015条差异表达序列标签(Expressed Sequence Tag,ESTs)(FDR≤0.001且丨 log2Ratio 丨≥1),其中上调表达与下调表达各有1 125条和890条,进一步先从中筛选出差异表达倍数大于5的31条上调表达和17条下调表达的ESTs(FDR≤0.001且丨log2Ratio丨>5)以及MAPK信号级联传导途径中3条上调表达EST;其次,以上述部分EST序列作为探针种子序列,通过电子克隆技术,获得了20条具有完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)的甘蔗差异表达基因cDNA全长序列,其中16条上调和4条下调表达,包括了MAPK(Mitogen-activated Protein Kinase,丝裂原活化蛋白激酶)信号级联传导途径中3个上调表达的基因BAK 1、Mapkk和Glo 1,3个转录因子基因GT-3b、MYB和h/ACA以及14个预测蛋白新基因;最后,重点研究了MAPK信号传导级联途径中上调表达的3个激酶基因BAK 1、Mapkk和Glo 1.利用RT-PCR技术,对BAK 1、Mapkk和Glo 1等3个基因进行克隆,获得了3个基因的cDNA全长序列,长度分别为1 291bp、1 302bp和1 091bp,其ORF长度分别为1 004bp、1 068bp和885bp.
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