菠萝4个AcAP2基因的克隆及表达分析

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【研究目的】从菠萝中克隆AP2基因,在转录水平上探索其对乙烯利的响应情况,研究他们在乙烯利诱导菠萝成花过程中发挥的作用。【方法】从菠萝基因组数据库中获得AcAP2基因全长序列,通过RT-PCR技术克隆AcAP2基因;借助多种生物信息学软件分析菠萝AP2基因及其蛋白信息;利用DNAman、MEGA6.0软件分别进行序列比对和进化树构建;通过qRT-PCR技术分析AP2基因在菠萝不同组织部位中对乙烯利的响应情况。【结果】克隆得到4个AP2家族基因,分别命名为AcAP2-1、AcAP2-2、AcAP2-3、AcAP2-4,开放阅读框大小分别为1353bp、1449bp、1368bp、1122bp,均具有典型的AP2结构域。系统进化树表明Ac AP2-1与油棕EgAP2-2、海枣PdAP2的遗传距离较近;AcAP2和AcAP3与蜻蜓凤梨AfAP2-1的遗传距离较近;AcAP2-4与油棕EgAP2-5的遗传距离较近。实时荧光定量PCR分析表明,叶片中4个AcAP基因整体呈现先下降后上升的表达趋势,分别在乙烯利处理后1d、6h、3h、1d表达量达到最高;茎尖中4个AcAP基因呈现先上升后下降的表达趋势,分别在6h、6h、6h、1d表达量达到最高。【结论】成功克隆了4个AcAP2家族基因,AcAP2-1、AcAP2-4与油棕的AP2成员在遗传距离上相近;AcAP2-2、AcAP2-3与蜻蜓凤梨的AP2成员在遗传距离上相近;乙烯利处理下这些基因均有不同程度的响应,说明他们可能参与响应外源乙烯利信号诱导菠萝成花。
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