传统发酵乳中乳酸菌的质粒的分离与鉴定

来源 :第五届中国乳业科技大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sddhyyj
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  乳酸菌是一种公认的食品级微生物,它广泛地存在于自然界中,无致病性.由于乳酸菌的益生性,它受到了广泛关注.很多编码乳酸菌独特性状的基因位于游离于基因组DNA之外的质粒上.乳酸菌质粒赋予了乳酸菌独特的性状,利于乳酸菌的生存;同时乳酸菌质粒也是改造乳酸菌的最佳载体.本文对现有乳酸菌质粒提取方法进行优化,确定了最佳的提取方法为碱裂解提取质粒法.对传统发酵乳中分离获得的多株乳酸菌,进行质粒的分离.研究发现个别株乳酸菌中含有质粒,其中52号乳酸菌中分离得到三种不同大小的质粒p52A、p52B以及p52C.经过16S rRNA鉴定,52号乳酸菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis),将其命名为E.faecalis 52.对p52A、p52B以及p52C进行限制性内切酶实验后,选择合适的、同种酶切后的载体分别与这三种质粒进行连接.筛选出构建成功的克隆载体并测定其完整的核苷酸序列信息.研究发现,p52A、p52B以及p52C的分子量分别为7500bp、5000bp和2500bp,均含有rep和mob基因,为构建食品级的表达载体奠定了基础.
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