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桑黄纤孔菌Inonotus sanghuang Sheng H.Wu,T.Hatt.&Y.C.Dai,俗称桑黄菇、桑耳,是近年来开发的一种寄生于桑树的多年生药用真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中,《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分,在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复等方面有活性作用。对桑黄中次级代谢物的研究已有一些报道,但多以子实体中的为主,菌丝体中报道的较少。对于子实体和菌丝体生长过程中产生的次级代谢物有何差异,目前还鲜有报道,菌丝体的功效是否可替代子实体也尚不明确。本研究以我们收集、保藏并进行分子鉴定的桑黄菌株Inonotus sanghuang为研究对象,分别进行了子实体栽培和液体及固体发酵培养,对栽培子实体和发酵菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化和抑制肿瘤细胞生长、抗氧化、抗衰老及体外降血糖活性研究。分别用等体积的石油醚,氯仿,乙酸乙酯和正丁醇依次萃取桑黄子实体醇提物,得到四种有机溶剂萃取相。以体外修复受损神经细胞和清除自由基能力为指标进行有效部位的筛选。实验结果表明:四个萃取相的抗衰老能力存在一定的差异。其中乙酸乙酯相和正丁醇相的活性要好于其他两个萃取相。乙酸乙酯和正丁醇与损伤的神经细胞之间均有显著性差异(P<0.05)。乙酸乙酯相清除超氧阴离子,过氧化氢和DPPH的IC50值分别为589.17μg/mL,5.60μg/mL,209.00μg/mL。正丁醇相清除三种自由基的IC50值分别为:483.12μg/mL,0.42μg/mL,56.22μg/mL。用硅胶、Sephadex LH-20等柱层析手段对抗衰老活性较高的乙酸乙酯相进行分离纯化,经过柱层析和重结晶反复纯化,得到11个单一化合物。对纯化后的样品进行1H NMR,13C NMR,DEPT,1H-1HCOSY,HMQC等波谱分析并结合相关文献报道数据,鉴定出六种化合物,它们分别为:星鱼甾醇,麦角甾-6,22-二烯-3β,5α,8α-三醇,灵芝醇B,灵芝酸DM,Inoscavin A,麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯。除了灵芝酸DM,其余的化合物对肿瘤细胞K562的生长具有很好的抑制作用。利用液体发酵、木屑固体发酵和米饭固体发酵三种方式培养桑黄菌丝体,对菌丝体醇提物的体外抗氧化、抗肿瘤和抗衰老生物活性进行了研究。结果发现,木屑固体发酵、液体发酵和米饭固体发酵的菌丝体醇提物清除H2O2自由基的IC50值分别为78.28±0.32、27.73±0.57和7.84±0.37μg/mL;米饭培养的桑黄菌丝体醇提物在低浓度500μg/mL下对超氧阴离子自由基清除作用到达80%,在相同的浓度下对DPPH自由基清除率也明显高于其它两种方法,表现出较高的抗氧化活性。木屑以及米饭培养方法得到的菌丝体对PC12神经细胞损伤修复均有较好的效果,液体培养的桑黄菌丝体表现的修复作用较低;液体发酵培养的菌丝体醇提物浓度在100μg/mL时,对肿瘤细胞HepG2的抑制率到达70%,高于其他两种培养方法的抑制作用。采用有机溶剂萃取、硅胶柱分离和高速逆流色谱法对固体发酵培养的桑黄菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化,经硅胶柱分离纯化出6个化合物,利用红外光谱(IR)、紫外光谱(UV),质谱(MS)及核磁共振技术(NMR)对分离纯化出的化合物进行了结构解析。经鉴定其中2个化合物为脂肪酸,其余化合物分别为Ergosterol麦角甾醇,Ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate,原儿茶醛Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛;经高速逆流色谱法结合硅胶柱层析纯化出7个化合物,分别为Inoscavin A,24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol,Baicalein,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside,Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛。对得到的化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长和抗氧化活性实验,结果表明:Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛,Inoscavin A,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside和Baicalein在抗肿瘤和抗氧化实验中都表现出较好的活性,对K562细胞的抑制作用效果明显。在清除过氧化氢实验中,柚皮苷和黄芩素在浓度80μg/mL时,清除率就达到70%左右。采用细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型对桑黄子实体和菌丝体中分离的化合物进行了体外降血糖活性研究,子实体化合物麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五酸酯和麦角甾-7,-二烯-3β-醇对DPPIV抑制效果最佳;菌丝体化合物中原儿茶醛、柚皮素和黄芩素的DPPIV抑制效果远高于其他化合物。