论文部分内容阅读
目的:以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOGIgd)为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立人类疾病多发性硬化（MS）的动物模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）;并检测EAE小鼠Foxp3的表达及CD4+CD25+Treg细胞的数量,初步探讨CD4+CD25+Treg细胞在MS发病机制中的作用。方法:①采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd-trxA融合蛋白,金属螯合亲和层析纯化,与完全弗氏佐剂形成抗原乳化物,按300ug MOGIgd/只小鼠于侧腹壁皮下多点注射;以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）和完全弗氏佐剂的乳化物按0.4ml/只同样方法免疫小鼠作为阳性对照组;同时以担体蛋白trxA和完全弗氏佐剂的乳化物免疫小鼠作为阴性对照组,生理盐水和完全弗氏佐剂的乳化物免疫小鼠作为正常对照组。免疫后第0及48h腹腔内注射400ng百日咳毒素（PT）。双盲法连续早晚观察30天,处死小鼠,脑脊髓标本切片作HE染色及髓鞘Luxol fast blue染色。②经流式细胞仪（FACS）检测小鼠脾脏中CD4+CD25+Treg细胞;③real-time PCR检测Foxp3的相对表达水平。结果:①经纯化后,MOGIga-trxA融合蛋白纯度达98%左右:MOG组及GPSCH组小鼠分别于免疫后（12.14±2.04）d、（13.40±1.67）d发病,发病率分别为75%、83%,表现为不活泼、弓背、尾部张力下降、肢体瘫痪、震颤、大小便失禁,发病后分别于（4.43±1.13）d、（3.80±1.48）d症状达峰,高峰期评分分别为（2.64±0.48）、（2.90±0.22）,两组均呈慢性非缓解型病程。阴性对照组及正常对照组无一动物发病。模型组动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累。②MOG组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例为（4.71±1.61）%,GPSCH组为（1.44±0.63）%,均明显低于阴性对照组和正常对照组（P<0.01）,且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义（P<0.01）。③MOG组标准化Foxp3的表达量为（2.26±1.97）,GPSCH组为（1.44±1.20）,均低于trxA组的（8.58±3.34） （P<0.01）;但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论:用MOGIgd免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型方法纯熟、稳定,发病率高,为今后进一步研究MS的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础。