【摘 要】
:
家蚕杆状病毒基因表达系统是目前高效的真核表达系统之一,但目前的技术在重组病毒构建和纯化过程中存在着重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长的缺点.为了较好地解决这个
【机 构】
:
浙江大学动物科学学院,杭州,310029
【出 处】
:
中国蚕学会第七届二次理事会暨学术年会
论文部分内容阅读
家蚕杆状病毒基因表达系统是目前高效的真核表达系统之一,但目前的技术在重组病毒构建和纯化过程中存在着重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长的缺点.为了较好地解决这个问题,我们借鉴国外AcNPVBac-to-Bac快速基因表达系统工作原理,利用细菌转座子的基因定位转移作用,在大肠杆菌内实现基因的转移重组,快速获得重组病毒,构建了可利用我国特色资源昆虫-家蚕的快速基因表达系统.具体的工作即对家蚕BmNPV基因组进行改造,通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子、插入有细菌转座子整合靶位点、编码LacZα肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体蛋白基因,获得家蚕BmNPV病毒穿梭截体BmBacmid;并利用供体质粒上的表达金和细菌转座子,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BmNPV病毒的构建.本研究的科学意义在于:在理论上它突破了家蚕BmNPV表达系统中重组病毒必须在昆虫活体或昆虫细胞内产生的思路,利用细菌转座子在细菌内构建完成家蚕BmNPV重组病毒,丰富了家蚕杆状病毒表达系统的理论;在应用上,由于它具有快速简便这一突出优点,很好地解决了家蚕杆状病毒表达系统目前存在的关键问题,具有较好的应用价值,在未来生物技术产业利用家蚕作为"生物工厂"表达生产重组蛋白及后基因组时代蛋白质结构功能分析方面,有望成为一个强有力的工具.
其他文献
本文就广西现行蚕种的冷藏目的及现行蚕种冷藏技术进行了详细介绍,并对蚕种冷藏技术的发展方向进行了展望。
本文利用微卫星(SSR)标记,构建了96个中国系统二化性家蚕品种的DNA指纹图谱.57对SSR引物共扩增出507条有效带,最多的一对引物扩增出了24个片段,最少的仅有1个,平均8.9个/引物
本文采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究发现不同品种的家蚕5龄第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成存在明显差异,并且不同蚕茧高产品种与蚕茧中、低产量品种之间所涉及的差异
在家蚕丝腺cDNA文库测序过程中,发现一个编码家蚕泛素结合酶的EST序列,利用3RACE方法克隆了一个新的家蚕泛素结合酶基因cDNA全长序列,命名为BmUCE2I(Gen-Bank登录号为DQ219874)
本文采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究了家蚕不同品种五龄期后部丝腺细胞的蛋白质组成变化.发现不同品种家蚕从五龄第1天到第4天后部丝腺细胞蛋白质组成的变化各不相同
本文通过整蚕(蛹)石蜡切片甲基绿-派罗宁和孚尔根染色的方法对变态期家蚕中肠、丝腺的形态结构进行的显微观察.实验的结果表明,在家蚕中肠变态过程中肠腔内出现的大量无定形
本文用家蚕质型多角体病毒病病原(CPV)为抗原免疫蛋鸡,对收集的卵黄液开展了体外中和和体内中和生物试验、不同免疫次数的卵黄液的阻断效果试验等,测定免疫卵黄液对CPV的防治
目的研究胃癌D3手术关键淋巴结清扫价值及对严重并发症进行分析。方法对84例胃癌UICC分期为Ⅱb期、Ⅲa期病人行标准胃癌D3根治术,对重要淋巴结转移率进行统计,对部分动脉行骨
短期光伏发电功率预测对电网调度计划的安排和优化具有重要意义.机器学习类算法的飞速进步有利于提高光伏发电功率的预测精度.文章提出了一种基于数据清洗与组合学习的光伏发
蚕用高效抗病毒剂"脓病清",对家蚕NPV、CPV及DNV均具有强烈的杀灭作用,能够有效防治家蚕病毒病,且对家蚕的生长发育及主要经济性状无不良影响,经豚鼠试验表明,对皮肤无刺激性