论文部分内容阅读
目的邻苯二甲酸酯类（Phthalate Esters,PAEs）是一种常见的塑化剂,是工业上被广泛使用的高分子材料助剂,其中使用最广泛的是DEHP.DEHP在塑料聚合物中以单体形式存在,主要通过消化道进入体内,并在人体内发生水解生成邻苯二甲酸单乙基己基酯（MEHP）。在人体尿液、血浆中均可检测出DEHP、MEHP的存在,但目前关于其对人类卵巢癌的影响及其具体机制的研究尚未见报道。本研究以DEHP、MEHP为研究对象,选用人卵巢癌细胞SKOV3、A2780作为模式细胞,探讨DEHP、MEHP对卵巢癌细胞迁移、侵袭等方面的影响,并研究产生影响的具体机制。材料与方法研究利用CCK-8法检测不同浓度的DEHP、MEHP对卵巢癌细胞增殖的影响;运用划痕愈合实验、Transwell侵袭实验检测对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹技术检测MEHP对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响;经500 nmol·L-1浓度MEHP处理后的SKOV3细胞运用高通量测序的方法进行转录组测序并分析测序结果,筛选出差异表达基因;最后运用细胞转染、实时荧光定量PCR等实验方法验证转录组测序的结果并探讨可能的作用机制。结果 10-8至10-5 M浓度范围的DEHP、MEHP对卵巢癌细胞的增殖能力无显著的影响;实验中不同浓度的DEHP对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均没有产生有统计学意义的改变,然而MEHP处理则以浓度梯度依赖的方式显著增加了卵巢癌细胞的迁移及侵袭能力,浓度为500nM时现象最为明显;进一步实验显示MEHP能够诱导卵巢癌细胞发生上皮间质转化——抑制上皮标记物ZO-1的表达,促进间质标记物N-cad、Vimentin和相关转录因子Slug的表达;500nM浓度MEHP处理后的SKOV3细胞经新一代测序的方法进行转录组学分析,筛选出297条差异表达的mRNA以及39条长链非编码RNA;在差异表达的39条lncRNA中,通过一系列分子毒理学实验验证了linc00205在MEHP促进卵巢癌细胞迁移、侵袭能力增加以及上皮间质转化中发挥了关键的调控作用。结论低剂量的DEHP对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力并没有影响,而低剂量MEHP却能够显著增加细胞的迁移和侵袭能力,并诱导上皮间质转化的发生,其中linc00205在MEHP促进卵巢癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化机制中发挥了关键作用。