【摘 要】
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目的 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)属于非受体型酪氨酸蛋白激酶,其虽在中枢神经系统中高表达,但甚少见其功能的相关报道.Pyk2可被细胞
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室,北京 100050
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目的 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)属于非受体型酪氨酸蛋白激酶,其虽在中枢神经系统中高表达,但甚少见其功能的相关报道.Pyk2可被细胞内升高的Ca2+激活,而细胞内Ca2+浓度升高可触发突触前膜的神经递质释放,但Pyk2是否参与中枢神经系统中突触前膜的神经递质释放过程并不清楚.因此本研究旨在探索Pyk2在神经递质释放中的作用.方法 该研究采用钙离子载体离子霉素诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)Ca2+浓度升高,进而触发多巴胺(DA)释放及Pyk2的激活.并采用Pyk2 siRNA干扰内源性Pyk2表达,构建Pyk2各磷酸化位点的突变体观察其对递质释放的影响.结果 Ca2+引起的Pyk2磷酸化与PC12细胞释放多巴胺具有时间同步性,提示其可能参与了神经递质释放过程.采用Pyk2 siRNA干扰内源性Pyk2表达后可明显抑制Ca2+诱发的PC12细胞DA释放,表明Pyk2在Ca2介导的DA释放过程中具有重要的作用.进一步的研究发现Pyk2的磷酸化改变具有位点特异性,即仅402位酪氨酸发生明显磷酸化改变,我们采用Y402位点特异性磷酸化抗体发现Pyk2时间依赖性的改变来源于其Y402位点的磷酸化改变,而过表达Pyk2Y402F突变体可明显抑制Ca2+浓度升高诱导的DA释放.结论 上述实验结果表明Pyk2 Y402位点磷酸化在离子霉素诱导的多巴胺释放中发挥了重要作用.提示我们对其有效调控可能是治疗神经递质释放紊乱的有效途径.
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