【摘 要】
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头孢菌素C(CPC)酰化酶是一种可以将头孢菌素C直接催化生成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的酶,具有重要的工业应用价值.在本研究中,我们将重组大肠杆菌产生的CPC酰化酶在经不同方
【机 构】
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北京科技大学化学与生物工程学院,北京,100083
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头孢菌素C(CPC)酰化酶是一种可以将头孢菌素C直接催化生成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的酶,具有重要的工业应用价值.在本研究中,我们将重组大肠杆菌产生的CPC酰化酶在经不同方法处理的环氧基载体上进行固定化,对固定化酶活收率、热稳定性及载体的再生和再利用等进行研究.研究结果表明,经聚乙烯亚胺(PEI,Mw 20000)修饰的环氧基载体(简称EP-PEI)可以获得较高的固定化酶活收率,优于用乙二胺(EDA)修饰的环氧基载体(简称EP-EDA)和未经修饰的环氧基载体(简称EP).EP-PEI载体的zeta电位为0.68,促进了带负电的酶和载体之间的静电吸引,EP-PEI得到的固定化酶的Km为22.0mM(游离酶Km为43.0mM),说明经PEI修饰的载体有利于底物与酶的结合.EP-PEI固定化酶具有较好的热稳定性,在45℃和pH8.5的条件下处理4h酶活残留81％.即使在1 M NaCl和pH8.0条件下处理30min,大约还有70％的CPC酰化酶保留在EP-PEI上,表明通过静电吸附作用得到的EP-PEI固定化CPC酰化酶具有足够的结合强度并有可能直接用于催化反应而不脱落.当使用较高浓度的氯化钠(例如,2M)和低的pH值(pH3),CPC酰化酶可以充分从EP-PEI解吸,载体可以再生并且再固定化.
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