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背景与目的:人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,其重要特征之一是具有强烈的侵袭性。传统的手术、放疗、化疗等治疗方法治愈率低,复发率高,预后极差。脑胶质瘤手术和放疗后复发与复发胶质瘤的治疗是临床上迫切需要解决的根本问题。免疫治疗被视为第四种肿瘤治疗模式,DC作为功能最强的抗原递呈细胞,在脑胶质瘤的免疫治疗中起重要作用,其中融合瘤苗Dendritoma不但拥有肿瘤细胞的所有抗原,同时还具有DC的抗原递呈和激活T细胞的功能,有其特殊的优势,正成为研究的热点。本实验制备胶质瘤与树突状细胞(DC)融合瘤苗,探讨其抗胶质瘤活性。方法:原代培养脑胶质瘤细胞,诱导患者外周血来源DC,PEG作用下将其与胶质瘤细胞融合,通过MTT法检测融合疫苗对脑胶质瘤细胞的体外杀伤作用。结果:DC的形态学观察及表型检测:从外周血获取的PBMC,培养2h后,获得贴壁细胞,加入细胞因子24h,可见有细胞聚集现象。初时集落较小,以后其直径逐渐增大。第6d可见细胞大多呈悬浮生长并聚集成团,集落中的细胞边缘毛茸状,具有DC的特殊形态。加入TNF-α后,镜下可看到细胞形态不规则,逐渐从聚集状态变为分散状态,表面出现明显毛刺状突起,为典型的树突状细胞形态。单个核细胞CD86、HLA-DR几乎不表达,GM-CSF和IL-4诱导培养后,CD86、HLA-DR低表达,符合不成熟DC表型,加入TNF-α后,CD86、HLA-DR高表达,反映DC已迅速成熟和激活。FITC标记的CD86预染的CD呈现绿色,染色胶质瘤细胞明场下观察细胞呈亮黄色,于570nm荧光激发,细胞全部呈现红色。在融合24小时内,倒置及相差显微镜下仅见细胞膜和部分细胞质相互接触,在胶质瘤细胞周围,有单个或数个DC和其融合,也有单个DC和数个胶质瘤细胞融合或DC与DC、胶质瘤细胞与胶质瘤细胞融合的现象。融合36h后荧光显微镜下观察,呈现双色荧光,DC为绿色,融合细胞为黄色。融合瘤苗激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对胶质瘤的杀伤作用显著高于联合培养组及其他对照组(P<0.01)。结论:融合瘤苗是更为有效的以DC为基础的抗胶质瘤方法。