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目的:分离培养大鼠脂肪间充质干细胞(adiposetissue—derived mesenchymal stem cells,ADMSCs),观察地黄多糖对大鼠ADMSCs生物学性状的影响,以及地黄多糖对大鼠ADMSCs向心肌细胞转化率的影响。
方法:取体重约200g的Wistar雄性大鼠,无菌条件下取双侧附睾处脂肪,用酶消化法分离获得细胞,含10%胎牛血清的DMEM培养基培养、传代。选取第3代大鼠ADMSCs应用免疫组织化学染色方法,检测其表面分子CD13.CD44.CD105.CD31.CD45等的表达。采用不同浓度地黄多糖(终浓度分别为0 mg/L、1mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200mg/L)干预第3代大鼠ADMSCs,消化计数法测定接种后2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h不同时间点的细胞贴壁率,MTT法绘制各组细胞生长曲线。应用浓度为10umol/L的5-氮胞苷诱导第3代大鼠ADMSCs24小时后,加200mg/L的地黄多糖干预培养4周,免疫组化染色法检测α-actin的表达,流式细胞仪检测大鼠ADMSCs向心肌细胞的转化率。
结果:大鼠附睾处脂肪中含有大量ADMSCs,呈长梭形贴壁生长,免疫化学染色鉴定CD13.CD44.CD105阳性,CD31.CD45阴性。大鼠ADMSCs接种后24小时贴壁率达95%,地黄多糖对大鼠ADMSCs的贴壁率无明显影响。第3代大鼠ADMSCs具有活跃的增殖能力,细胞生长曲线均呈S型,前48小时为潜伏期,3~5天为对数生长期,第6天起逐渐进入生长平台期,加不同浓度地黄多糖干预后,大鼠ADMSCs的生长增殖能力均提高,而且呈浓度依赖性。大鼠ADMSCs在体外经5-氮胞苷诱导后4周,地黄多糖干预组和单纯5-氮胞苷诱导组均未观察到自主跳动的心肌细胞,两组细胞免疫组织化学染色α-actin阳性;流式细胞仪检测地黄多糖干预组与单纯5-氮胞苷诱导组大鼠ADMSCs向心肌样细胞的转化率分别是57.89%和17.38%。
结论:Wistar大鼠脂肪组织中含有大量ADMSCs;地黄多糖可以促进大鼠ADMSCs的生长增殖,是ADMSCs在体外培养扩增的有利因素。同时,地黄多糖干预能够提高大鼠ADMSCs经5-氮胞苷诱导后向心肌样细胞的转化率。