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目的：建立高效液相色谱法测定维生素B12滴眼液中的维生素B12的含量的方法。方法：色谱柱为迪马C18检测波长为237nm，流动相为乙腈-0.05 mol·L-1的磷酸二氢钾(14：86)(用磷酸调pH3.0)，流速为1.0 mL·min-1，柱温为25℃。结果：维生素B12线性范围为0.24—0.58μg·mL-1。(r=0.999 7)，平均回收率为99.92%(RSD=0.1%)。结论：本方法简便，快速，准确度高，可用于该制剂的质量。