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目的:采用毛细管区带电泳法研究人趋化素样因子1C端活性多肽CKLF1-C19/C27与肝素的相互作用,并进一步研究CKLF1-C19与肝素相互作用的关键氨基酸残基结合位点。
方法:在pH 7.2的Tris-醋酸缓冲溶液中,CKLF1-C27/CKLF1-C19/ CKLF1-C19pm/CKLF1-C19km与肝素于37℃以不同比率混合温育20min 后进样,分离在6min内完成。
结果:CKLF1-C19和CKLF1-C27与肝素均发生了相互作用,证实了最初的推断。通过Scatchard分析计算,得到CKLF1-C19和CKLF1-C27与肝素的结合常数分别为(3.38±0.49)×105M-1和(1.10±0.02)×105M-1。同时证明,CKLF1-C19肽链上的赖氨酸残基在相互作用的过程中发挥了重要作用,脯氨酸残基也会影响CKLF1-C19和肝素间的结合。
结论:本实验采用的毛细管区带电泳法研究CKLF1-C19和CKLF1-C27与肝素相互作用的方法快速、准确、可靠。为进一步探讨CKLF1-C19和CKLF1-C27在体内的活性及其生物学意义打下了基础。