论文部分内容阅读
目的:比较活BCG和灭活BCG对人外周血淋巴细胞和小鼠脾细胞的增殖作用;提取、分离、纯化和鉴定BCG的有效组分,分析有效组分对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖、细胞因子及NO等产生、对特异性杀伤活性和吞噬活性作用等的影响,探讨其有效组分的免疫调节活性及抗肿瘤机制,为肿瘤治疗开发一种疗效好、副作用少的生物制剂.方法:1.采用MTT法测定人淋巴细胞和小鼠脾细胞的增殖作用.2.采用酶裂解法和超声波破碎法裂解BCG,提取其活性蛋白质,通过葡聚糖凝胶层析方法提取分离,进一步用SDS-PAGE电泳方法进行纯度及分子量的鉴定.3.用ELISA方法检测小鼠脾细胞分泌IL-12TNF-α和IL-4等细胞因子的含量;用Gress方法检测NO水平.4.采用MTT法测定小鼠脾细胞对人膀胱癌细胞株的杀伤活性以及小鼠腹腔巨噬细胞对人膀胱癌细胞株的吞噬活性.结果:1.活BCG和灭活BCG在浓度为3.6×103cfu/ml以上时可明显促进小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞进行增殖(p＜0.01),并呈良好的剂量效应关系.活BCG对小鼠脾细胞和人外周血单核细胞的增殖作用比灭活BCG的作用明显(p＜0.05),并随着浓度的增加其差异越显著.活BCG和灭活BCG对小鼠脾细胞的增殖作用比人外周血单核细胞的增殖作用明显(p＜0.05).2.裂解活BCG提取其蛋白成分,经分离纯化后可得三个组分BCGE1、BCGE2和BCGE3,分子量分别为42.5kDa36.3kDa和28.6kDa.3.BCGE1在320μg/ml浓度以上对小鼠脾细胞的增殖具有一定的促进作用(p＜0.05),并能诱导小鼠脾细胞产生少量的IL-12、TNF-μ(p＜0.05),诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO(p＜0.05).BCGE2和BCGE3在浓度为80μg/ml时就可以刺激小鼠脾细胞进行增殖和产生IL-12、TNF-α,以及诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO(p＜0.01).在浓度为640μg/ml时,BCGE2对小鼠脾细胞的增殖指数为7.1,诱导小鼠脾细胞产生的IL-12、TNF-α分别为159.74pg/ml和128.pg/ml,诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO为8.21μg/ml(p＜0.01).在浓度为640?g/ml时,BCGE3对小鼠脾细胞的增殖指数为4.66,诱导小鼠脾细胞产生的IL-12、TNF-α分别为128.76g/ml和106.71pg/ml,诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO为7.62μg/ml(p＜0.01).因此BCGE2对小鼠脾细胞的增殖和诱导产生IL-12、TNF-α的作用,以及诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的作用比BCGE和BCGE3都强.BCGE1、BCGE2和BCGE3都不能诱导小鼠脾细胞分泌细胞因子IL-4.4.BCGE2可体外诱导小鼠脾细胞对膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤作用,在效靶比为20:1时对T24细胞的抑制率为42.31﹪,而对照组仅为13.32﹪,两者相比有非常显著性差异(p＜0.01).经BCGE2体外诱导的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性明显增强,在效靶比为20:1时其抑制率为50.93﹪,而对照组仅为12.62﹪,两者相比有非常显著性差异(p＜0.01).结论:1.活BCG和灭活BCG对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞的增殖活性都具有促进作用,且随着浓度的增加而增强;活BCG的促增殖作用比灭活BCG的作用显著.2.BCGE2和BCGE3是BCG的有效组分,能刺激小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子IL-12和TNF-α等的分泌,但对IL-4的产生无诱导作用.BCGE2和BCGE3还能刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO.3.BCGE2诱导的小鼠脾细胞对膀胱癌细胞T24的杀伤作用最显著,经其诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性也明显增加,且随着效靶比的增加而增强.