【摘 要】
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目的:用体外研究方法,通过检测Caspase-9活性及细胞凋亡,探讨Caspase-9在有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡中的作用。 方法:用0.125、0.25、0.
【机 构】
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安徽医科大学公共卫生学院卫生毒理系 安徽医科大学皮肤病研究所
【出 处】
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中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议
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目的:用体外研究方法,通过检测Caspase-9活性及细胞凋亡,探讨Caspase-9在有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡中的作用。
方法:用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L的TCE处NHEK 4h,并培养4、8、12、24 h,分光光度法检测上清中Caspase-9活性,Anncxin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,然后用2.0 mmol/L TCE染毒4h后培养至12 h。
结果:不同浓度TCE处理NHEK 4h后培养不同时间,可诱导caspase-9活性呈现剂量-和时间-效应的升高,培养12和24h时,各TCE处理组caspase-9活性与溶剂对照相比差异均有统计学意义(p<0.05)。不同浓度TCE处理NHEK4h后培养12h,凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随着TCE剂量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE组外,其它各处理组Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与对照组相比差异均有统计学意义(p<0.05)。相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-9活性呈正相关(p<0.05)。100μmol/LZ-LEHD-FMK预处理明显抑制2.0mmol/LTCE诱导的caspase-9活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(p<0.01)。
结论:内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9在TCE诱导的NHEK凋亡中被激活。
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