猪流感RT-PCR快速诊断方法的建立

来源 :中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户：slylzz

【摘要】

：

根据猪流感病毒M基因的序列分析结果,设计了一对扩增M基因特异性引物.采用该技术对H1、H3、H5和H9 4个亚型猪流感病毒标准参考株,RT-PCR检测的结果都呈阳性,对猪副粘病毒、圆环病毒2型、猪呼吸与繁殖综合症病毒、猪伪狂犬病毒RT-PCR扩增结果都呈阴性.RT-PCR最少可检测到1000EID50的病毒核酸.采用该对引物,直接从猪流感病毒感染小鼠的组织样品中提取核酸,RT-PCR阳性结果和鸡胚

【作者】

：

杨焕良乔传玲陈艳辛晓光李海燕陈化兰

【机构】

：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨,150001

【出处】

：

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

【发表日期】

：

2006年8期

【关键词】

：

猪流感病毒 M基因序列分析 RT-PCR检测方法

下载到本地 , 更方便阅读

下载此文赞助VIP

声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架

论文部分内容阅读

其他文献

猪瘟兔化弱毒株E2基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的初步表达

为了获得猪瘟病毒E2可溶性糖蛋白,本研究用增强烈型荧光蛋白基因(EGFP)作为标签,将猪瘟兔化弱毒(HCLV)E2基因克隆至pCI表达质粒CMV启动了之下,构建了含有EGFP和HCLVE2融合基因(GFPTE2)的真核表达质粒pCIGFPTE2-339.转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞CHO(dhfr)后,用0.25uM的氨甲喋(MTX)加压筛选,10天后在荧光显微镜下观察到了暗绿色荧光,说明p

会议

猪瘟病毒E2基因真核表达CHO(dhfr)重组质粒构建

我国部分地区禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

从山东、河南、江苏、辽宁、河北、广西等10余个省、市、自治区临诊上有典型大肠杆菌病病变的病禽2000多羽采集病料,分离培养和鉴定出504株大肠杆菌.其中126株,经O血清型鉴定,除18株未能定型,7株自凝外,共鉴定出101个分离株为O血清型,这些分离株覆盖了31个血清型,但以078、02、O45、O109、O18、O8/O93、O107、O53、O154等10个血清型为主,共53株,占定型菌株的5

会议

禽大肠杆菌分离株致病性O血清型药敏试验分离鉴定

大肠杆菌O感染的动物模型

目前已有许多动物被用作STEC和stx相关疾病的模型研究,这些动物在作为模型的可利用性、费用、操作的难易度、与人类疾病的相似性及其它因素方面都有它的利和弊.总之,每种动物模型都可能为将来成功地预防、控制和治疗人类STEC感染提供重要线索.

会议

大肠杆菌O:H感染动物模型产志贺毒素大肠杆菌

EHEC O:H stx基因缺失突变株的构建

本研究针对EHEC O:H的stx基因通过PCR扩增出缺失了183bp的stx基因片段,将其克隆到自杀性载体pCVD442中,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442::△stx从SM10pir转到O:H中,利用抗性标记和PCR方法筛选出O:H stx基因缺失突变菌株.Vero细胞毒性实验证实该突变株不能产生完整的Stx.动物实验表明与强毒株相比该突变株的致病性明显降低.该突变株的构建为研

会议

肠出血性大肠杆菌O:Hstx基因缺失突变致病性自杀载体

猪瘟兔化弱毒和猪瘟石门强毒接种后猪血液生理生化指标的测定

选择临床健康的1.5-2月龄的无猪瘟病毒感染和无猪瘟抗体的大白猪,共17只.分三组,A组接种猪瘟兔化弱毒,B组接种猪瘟石门强毒,C组为阴性对照.定期采集三组猪的抗凝血和血清进行16项生理指标15项生化指标的测定.将测定结果进行t检验表明:A组与B组生理生化指标差异显著的是ALB;A组与C组生理生化指标差异显著的是TBIL、PCT;B组与C组生理生化差异显著的是BUN、PCT、PLT、GR％.

会议

猪瘟生理生化指标血清学检测

猪传染性胃肠炎病毒SCY株3'端序列的结构分析

根据GenBANK的核酸序列,设计8对引物从TGEV模板中分别扩增了1.9kb、1.6kb、1.5kb、2.0kb、1.1kb,1.4kb,1.4kb,1.3kb共8个片段,经测序拼接后获得8495 bp的TGEV序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3A、NSP3B、ORF7S、M、N、E、NSP3A、NSP3B

会议

猪传染性胃肠炎病毒M基因S基因N基因冠状病毒结构特征序列分析

MDCK细胞分离猪流感病毒方法的建立

从来自全国4个省的432份样品中在犬肾传代细胞系(MDCK)成功分离并培养4株猪流感病毒.经HI试验检测为H1亚型猪流感病毒,传至4代血凝效价增高可达8log2.本试验首次在国内建立用MDCK细胞系分离猪流感病毒,为猪流感的分离建立了一个便捷,经济的新方法,同时为猪流感病毒的基础研究、诊断及分子生物学等研究奠定了基础.

会议

猪流感病毒犬肾传代细胞系病毒分离分子生物学

应用RNAi技术抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的研究

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为特征的、严重危害养猪业的主要传染性疾病之一,给世界范围的养猪业造成巨大经济损失.PRRS病毒(PRRSV)对宿主淋巴细胞有严格嗜性,其RNA基因组易变异,常规的疫苗设计策略难以产生理想的免疫效果,因此,探索防治该病的新方法有重要意义.RNA干扰(

会议

猪繁殖呼吸综合征病毒病毒复制RNA干扰小干扰RNA短发夹RNA猪传染病疫苗免疫

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h,

会议

猪流感H3N2亚型反向遗传技术细胞培养流感疫苗重组细胞

猪瘟病毒石门强毒株和兔化弱毒疫苗株E2蛋白抗原结构域差异研究

为研究猪瘟SM强毒株和HCLV株E2蛋白主要抗原结构域在分子水平和免疫水平上的差异.用PCR技术从重组质粒分别扩增了SM株和HCLV株E2基因的主要抗原结构域ABCD和C片段,分别克隆于pMAL-p2X载体中,经PCR和测序鉴定,E2基因的2个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确.将构建的重组质粒转化到表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和

会议

猪瘟病毒E2蛋白抗原差异抗原结构域SM强毒株

猪流感RT-PCR快速诊断方法的建立

与本文相关的学术论文