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为揭示骨髓细胞(BMC)液氮长期保存后间充质干细胞(MSC)活力,从98人份经加低温保护荆、程控降温仪降温、液氮保存23-25年的BMC中取20人份复温,复温细胞体外行MSC初始和传代培养,传代细胞(P1～P5)再行成骨和神经细胞诱导。检测培养全过程细胞的形态、增殖数量,细胞化学、免疫组化染色和抗原表达,计贴壁细胞回收率、相对增殖率和MSC相对回收率。
结果是：初始培养10d时旋涡状生长,14d时成纤维样细胞为(88.2±4.3)％;P1～P5传代培养时,7d时旋涡状生长,传至P5时细胞扩增至60倍以上;P3时,成纤维样细胞为(94.7±3.6)％,细胞高表达CD29、CD90、CD44、CD71、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR,P3细胞成骨诱导后ALP和茜素红染色强阳性,细胞内ALP含量明显增高,P3细胞神经细胞诱导后NSE、Nestin阳性;细胞增殖和周期未发生改变。贴壁细胞回收率、相对增殖率和MSC相对回收率的结果分别为(52.14±5.6)％、(98.1±1.1)％和(48.5±8.6)％。结论是用传统降温、液氮保存骨髓细胞,至少在23-25年时,骨髓细胞内MSC性质不变、活力良好,达到了长期保存的目的。