【摘 要】
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目的：测定本品PEG-IFN-SA中残留游离IFN-SA对其体外活性的影响。 方法：通过Gel-HPLC分离纯化PEG-IFN-SA，分别收集相应的Di—PEG—IFN—SA、PEG-IFN-SA和IFN-SA保留时间的组份
【机 构】
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重庆理工大学化学与生物工程学院，重庆 400000
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目的：测定本品PEG-IFN-SA中残留游离IFN-SA对其体外活性的影响。
方法：通过Gel-HPLC分离纯化PEG-IFN-SA，分别收集相应的Di—PEG—IFN—SA、PEG-IFN-SA和IFN-SA保留时间的组份峰。分离后的三组分按一定稀释倍数稀释后,分别测定其抗病毒活性(对WISH/VSV的保护作用)，并计算生物活性单位。以PEG-IFN-SA原液100μl(0.5mg/mL)的总活性计算每个组份回收的总活性百分比。
结果：通过Gel-HPLC可以有效地分离IFN-SA和PEG-IFN-SA，其中IFN-SA保留时间为17.7min，PEG—IFN-SA保留时间为12.1min，两者分离度大于1.5。PEG-IFN-SA原液经Gel-HPLC分离纯化后，由色谱分离图分析可知相当于游离IFN-SA的组份峰约占1.0％的比例。在体外抗病毒活性测定中，经计算可得峰2组份(PEG-IFN-SA)回收活性占96％，峰1组份(Di-PEG-IFN-SA)回收活性占1％，峰3组份回收活性占0.01％。用RP-HPLC进行PEG-IFN-SA纯度分析，测得游离IFN-SA残留量低于0.1％。
结论：游离IFN-SA残留量低于0.1％，且回收的峰3无抗病毒活性。因此，峰3中无游离IFN-SA可能是其他小分子物质。三次重复实验证明，PEG-IFN—SA原液抗病毒活性可达7.8×106IU/mg，无游离的IFN-SA残留对活性影响。
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