目的:通过免疫电镜观察MAPK在膀胱部分梗阻2周的兔平滑肌细胞内的定位与激活后移位。方法:建立雄性新西兰白兔膀胱出口部分梗阻2周的动物模型。正常雄性白兔作为对照组。组织取材于前处理:新鲜组织离体1min内进入固定液液滴,除去由剪刀留下的挤压伤组织,取最接近无损伤的组织。快速分切成1mm~3以内大小的组织块5-6块,2.5%戊二醛固定后,1%锇酸后固定1h,常规脱水,环氧树脂包埋,制成500nm切片。免疫处理:抗:JNK1-1:20,JNK2-1:20,ERK1-1:20,ERK2-1:20,p38-1:80。二抗:稀释的金标二抗(ERK1为羊抗鼠1:50,其他为羊抗兔1:50)结果:在对照组,免疫电镜下在细胞核周围没有发现特异性的胶体金被标记。而在梗阻2周组的兔平滑肌细胞的细胞核周围,可以看到大量的ERK2胶体金标记的颗粒。提示在梗阻2周组的兔膀胱平滑肌中,ERK2被磷酸化激活后与胞质蛋白的亲和力下降,而与ERK2具有高亲和力的核蛋白丰度和亲和力增加,从而导致ERK2移位入核。而JNK1、JNK2、P38、ERK1核内外表达不明显或没有明显差异。表明在梗阻2周组的兔膀胱逼尿肌细胞中,ERK2/MAPK信号通路被激活,由此推测逼尿肌细胞收缩功能的改变与ERK2/MAPK信号通路的激活密切相关。结论:MAPK的定位与激活后移位是信号传导的重要方式。在未受刺激时,MAPK处于无活性状态,由于未磷酸化的MAPK与某些胞质蛋白具有高亲和力相互作用,而在核中与MAPK相互作用的亲和力较低的原因,MAPK主要位于胞质中。MAPK被磷酸化激活后与胞质蛋白的亲和力下降,而与MAPK具有高亲和力的核蛋白丰度和亲和力增加,从而导致MAPK移位入核。在信号被灭活后,MAPK被去磷酸化,与胞质蛋白的相互作用增加及失去高亲和力的核结合位点,因而返回到胞质中。