【摘 要】
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根据Prideaux等(1999)的引物和传染性胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌(APP-7)L25-4株的apxII操纵子的部分序列设计并合成了两对引物,从APP-7WF83株PCR扩增apxIIC基因上游2,200bp左
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室,雅安 625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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根据Prideaux等(1999)的引物和传染性胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌(APP-7)L25-4株的apxII操纵子的部分序列设计并合成了两对引物,从APP-7WF83株PCR扩增apxIIC基因上游2,200bp左右的片段作为左同源臂,将该片段与pBS-T载体连接,选择正向克隆质粒,命名为pBSL;PCR扩增apx IIC基因下游1,000bp左右的片段作为右同源臂,将该片段与pMD19-T Simple载体连接,得到克隆质粒,命名为pMD19-SR.根据pEGFP-N1序列设计并合成了一对引物,从pEGFP-NI PCR扩增800bp左右的卡那霉素抗性基因,将谊片段与pMD19-T Simple栽体连接,得到克隆质粒,命名为pMD19-K.另外,质粒pMD19-K经EcoR I和BamH I酶切消化得到卡那霉素抗性基因,克隆到pBSL中的EcoR I和BamH I位点,获得中间栽体pBSLK;质粒pMD19-SR经BarnHI和Sac I酶切消化得到卡那霉素抗性基因.克隆到pBSLK中的BamHI和Sac I位点,获得了重组转移载体pBSKA.
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