西尼罗病毒E domainⅢ基因在昆虫S2细胞中的表达与鉴定

来源 :第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ylh644894056
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)膜蛋白E(EnvelopeGlycoprotein)结构域Ⅲ(domainⅢ)位于WNV病毒膜蛋白的最表面,是诱导机体产生抗体的主要保护性抗原,同时domainⅢ也是WNV感染细胞时与细胞表面结合的主要位点。本研究根据GenBank中发表的WNVE domainⅢ基因序列设计了一对引物并分别引入NotⅠ和NcoⅠ酶切位点,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段。回收目的基因片段,并用NotⅠ和NcoⅠ限制性内切酶消化,经纯化后,将其定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5中,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin(杀稻瘟素)进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ.细胞的基因组DNA, PCR检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用终浓度500μmol/L的硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。结果表明,本研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12μg/mL的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E domainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。
其他文献
Granulomatis曼氏杆菌是导致牛、羊呼吸道传染病的一种病原菌。为快速、准确诊断由本菌导致的疫病,从基因库中获得M.granulomatis的基因序列,再从M. granulomatis的基因序列中获得与其它细菌包括溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌等不同的基因片段,设计成引物,建立了特异性好、敏感性较高的M.granulomatis的PCR诊断方法。试验结果表明,其特异性为100%,最小检出量
目的:评价Identifiler系统在造血干细胞移植术后白血病监测中的应用价值,探讨建立标准化的造血干细胞移植物监测方法。方法:采集移植术后受供者血液及受者颊粘膜拭子作为样本,采用Identifiler系统荧光标记复合扩增15个STR基因座,对14例接受造血干细胞移植的患者进行移植监测,观察受者在移植术前后STR基因型的变化。结果:13例患者中,7例移植后的血细胞STR分型与供体完全一致,表现为完
目的:拉米夫定(lamivudine)是核苷类的抗乙型肝炎病毒的常用药物,但是长期服用会引起对拉米夫定的耐药性。本研究旨在建立一种敏感、特异、重复性好的实时荧光PCR定量检测拉米夫定耐药性的方法,为临床治疗提供指导。方法:设计引物和MGB探针,利用TaqMan-MGB探针技术,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果:应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测YMDD变异株基因,具有灵敏
目的:探讨无偿献血人群中ALT、抗-HCV、HBsAg、TP以及抗-HIV不合格模式分布情况以及彼此之间的关联程度。方法:利用Excel对郑州市2002~2006年340475份无偿献血者的血液检验结果进行统计。结果:血液总的不合格模式有22种情况,其中ALT、HBsAg、抗-HCV、TP、抗-HIV各项不合格模式依次为10、9、11、7种;血液复检不合格率前12种模式由高到低依次为ALT>抗-H
经过近20年对宫颈癌病因学的大量研究结果表明,持续性感染人乳头瘤病毒(HPV)是导致宫颈癌的必然因素。但是,研究人乳头瘤病毒时,由于所取标本为宫颈分泌物,难以确定取样量的多少,目前对研究人乳头瘤病毒负荷量方面的研究报道不多。本试验采用双色荧光实时定量PCR方法,对年龄在20 } 56岁之间的250例门诊人乳头瘤病毒检测为阳性的妇女宫颈取样标本进行了HPV分型及病毒负荷载量的研究。采用日一球蛋白为内
近年来,安全输血越来越得到人们的高度重视。如何遏制经输血传播疾病、保障输血安全和提高检验质量、杜绝医疗事故已成为血站实验室每个工作人员的重要课题。本文是根据笔者的一些体会来谈谈血站实验室免疫学检验的质量保障。
目的:建立人类血小板抗原基因分型的方法,以探讨临床安全输注血小板的可能。方法:用聚合酶链-序列特异性引物技术(PCR-SSP)对血小板抗原(HPAl~5,1 5)进行基因分型。结果:此方法可以得到血小板抗原基因分型结果,试验重复性好。结论:PCR-SSP方法可以对人类血小板抗原基因分型,为临床更安全输注血小板提供可能。
目的:在红细胞血型血清学检测中,制备能够替代新鲜红细胞的红细胞膜磁化试剂。方法:采用低渗法、反复冻融法及加入裂解剂方法制备红细胞膜,并应用凝集抑制试验测定ABO系统抗原性与特异性。研究细胞膜与磁性纳米粒子结合方式,与新鲜细胞同时测定人ABO系统人血清抗体特异性来评价红细胞膜磁化试剂的质量。同样用此方法制备筛检红细胞膜磁化试剂,应用相应的抗体试剂测定制备前后筛检细胞抗原谱的变化。结果:用于包被磁粒的
风湿性心脏病是风湿性炎症过程所致心肌、心外膜、心瓣膜及其附属结构雌索、乳头肌)损害,最终导致心功能丧失、心包炎、心瓣膜狭窄和关闭不全的功能异常以及血液动力学障碍。风湿性心脏病的发病机制并不十分明确,多数倾向于抗原抗体交叉反应学说,即链球菌细胞壁的c抗原啼蛋白)和M抗原(蛋白质)与结缔组织(如心瓣膜及关节等)和心肌、平滑肌等具有共同的抗原性,链球菌壁的抗原(蛋白质)刺激机体产生抗体、可引起结缔组织、
化学治疗是治疗恶性肿瘤的常规手段之一。由于肿瘤本身存在个体差异性,即便是同一组织学类型和分化程度相同的肿瘤,对药物敏感谱也显著不同。如果在用药前缺乏该癌症患者对化疗药物敏感性和耐药性的直接实验依据,在化疗方案的制定上不可避免地存在一定的盲目性。选药物不准,不仅将有损患者身体健康,还会诱导肿瘤细胞产生多药耐药,贻误治疗时机。因此在临床实践中亟需一种能在治疗前为患者筛选敏感药物的技术方法,实现肿瘤患者