【摘 要】
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目的:应用液相色谱质谱联用技术对多种治疗性单克隆抗体进行肽图分析,经质谱鉴定各个单克隆抗体识别抗原的CDR区相关的特征峰.
方法:贝伐珠单抗、利妥昔单抗、阿达木单抗
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司,武汉430207
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的:应用液相色谱质谱联用技术对多种治疗性单克隆抗体进行肽图分析,经质谱鉴定各个单克隆抗体识别抗原的CDR区相关的特征峰.
方法:贝伐珠单抗、利妥昔单抗、阿达木单抗、西妥昔单抗、生物类似药IgGl单抗MAb-RS经盐酸胍变性、DTT还原、烷基化处理后超滤置换缓冲液,采用胰酶进行酶切,反应结束后进行液质联用分析,采用MSE模式获得各个肽段母离子一级质谱数据及二级质谱数据,经Biopharmlynx软件分析鉴定出各个抗体CDR区对应的特征峰.
结果:各个抗体经软件分析在单一酶切的条件下序列覆盖率均达到90％以上;各抗体CDR区对应的特征峰所在的氨基酸序列均通过质谱鉴定出,利妥昔单抗轻链CDR1及CDR2位于同一胰酶酶切肽段内,二者被同时鉴别出;阿达木单抗2:T4及2:T9肽段只包含可变区部分氨基酸,并作为LC CDR1及LC CDR3的的鉴别肽段,HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出;生物类似药MAb-RS的HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中也属于共流出肽段.
结论:本研究采用液质联用肽图法对多种治疗性单克隆抗体及一种生物类似药进行了针对单克隆抗体Fab段与抗原的结合区域CDR区进行专属性鉴别,结果表明该分析方法适用于单抗的专属性鉴别,今后可作为一种平台化方法应用于治疗性单克隆抗体开发过程及日常质控检测.
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